2023年12月21日发(作者：图片素材网)
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176 ?药学研究? Journal of Pharmaceutical Research 2021 Vol.40，No.3?制剂研究?三叶青片剂的质量标准研究周煜恒I，2,徐惠龙I，2,苏澜I，2,余佳敏1,许文l，2* ,范世明l，2* ,徐伟“2
(1.福建中医药大学药学院，福建福州350122;2.福建中医药大学生物医药研发中心，福建福州350122)摘要：目的研究三叶青片剂的质量标准，为其质量控制奠定基础。方法采用薄层色谱（TLC)法鉴别三叶
青片剂中荭草苷、异荭草苷、牡荆素、牡荆素鼠李糖苷及异牡荆素；采用三乙胺显色紫外-可见分光光度（UV-Vk)
法，测定三叶青片剂中总黄酮的含量；建立高效液相色谱（HPLC)法测定三叶青片剂中8个主要成分（荭草苷、异荭
草苷、牡荆素、牡荆素鼠李糖苷、异牡荆素、绿原酸、新绿原酸及隐绿原酸）的含量，Wekh Ukimate XB-CI8色谱柱
(4.6 mmX 150 mm，2.7 pm
)，祥度洗脱，检测波长：330 nm，流速:0.4 mL . min-1。结果薄层色谱法鉴别三叶青片
1 : 1 : 1，
A1C13显色后紫外光365 nm下检视；紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量，以牡荆素计，在1.85?11.1邮.mL-1范
围内与吸光度值呈良好的线性关系，平均加样回收率为98.43%，兄为2.46%。建立的高效液相色谱法，在考察的
浓度范围内，8个成分的浓度与峰面积呈良好的线性关系（r>0.999 0)，平均回收率为96.88%?99.25%，兄为
1.94%?2.47%。结论本试验建立薄层色谱法鉴别三叶青片剂中荭草苷、异荭草苷、牡荆素、牡荆素鼠李糖苷及异
牡荆素，用紫外-可见分光光度法测定三叶青片剂中总黄酮含量，用高效液相色谱法测定8个主要成分含量，为三
叶青片剂的质量控制提供参考。关键词：三叶青片剂；质量评价;薄层鉴别；含量测定中图分类号：R927文献标识码：A文章编号=2095-5375(2021)03-0176-007
剂中荭草苷、异荭草苷、牡荆素、牡荆素鼠李糖苷、异牡荆素的展开剂为乙酸乙酯：曱酸：曱苯：水=8 :
doi：10.13506/.2021.03.008ZHOU Yuheng1’2 ,XU Huilong1’2 ,SU Lan1’2 ,YU Jiamin1,XU Wen1’2* , FAN Shiming1’2 *,XU Wei1’2
of Pharmacy t Fujian University of Traditional Chinese Medicine f Fuzhou 350122 , China)
of Biomedical Research & Development’Fujian University of Traditional
Chinese MedicineFuzhou 350122China(Study on quality standard of Tetrastigma hemsleyanum Tablets ’ ’)Abstract
：
Objective To study the quality standard of the Tetrastigma hemsleyanum Tablets
(THT) ’
and provide the
foundation for its quality control. Methods Using thin-layer chromatography
(
TLC
)
to identify orientin’
isoorientin,
vitexin，vitexin-2-〇-rhamnoside and isovitexin in THT;Triethylamine color development with UV-Vis spectrophotometry
was used to determine the content of total flavonoids in the THT;
High performance liquid chromatography
(
HPLC)
was es?tablished to deter^nine 8 major components
(
orientin
’
isoorientin
’
vitexin
’
vitexin -2-
〇-rhamnoside
’
isovitexin
’
chlorogenic
acid’neochlorogenic acid and cr^^ptochlorogenic acid) ’Welch Ultimate XB-C18
column
(4.6 mmx150 mm’2.7 ^m) ’gradi?ent elution’detection wavelength：330 nm’flow rate：0.4 mL
?
min
s TLC to identify orientin’isoorientin’vitexin’
vitexin-2-〇-rhamnoside
’
and isovitexin in the THT using the developing agent ethyl acetate ? for^mic acid ? toluene ? water
=8 ? 1 ? 1 ? 1
’after AlC“ color development’
inspection under ultraviolet light 365 nm;
UV-Vis method to determine the基金项目：中央本级重大增减支项目（Wo.2060302);福建省自然科学基金项目（Wo.2018W0012、201810009);中医药公共卫生服务补助专项
(Wo.财社[2019]39号）；福建省大学生创新创业项目（Wo.2);校管科研课题-平台项目（Wo.X2019002-平台）；*同为通信作者
作者简介:周煜恒，男，研究方向：中药资源与质量评价,E-mail:1034116708@
通信作者:许文，男，博士研究生，研究方向：中药药效物质基础和作用机制研究,Tel**************,E-mail:yaoxuexuweii@ ;范世明，
男，高级实验师，研究方向：中药资源与质量评价,Tel:059卜22861135,E-mail:r3570379@
药学研究? Journal qf PharmMewtiad Research 2021 V〇!.40，N〇.3 *
177 *total flavonokk content，there is a good linear relationship with the absorbance value at the range of 1.85-11.1 pg mL 1 of
vitexin,and the average recover^^
was 98.43% with the RSD of 2.46%.The established HPLC method showed a good linear
relationship between the concentration of the 8 components to their peak areas
(r>0.999 0)
within the investigated concen-
average recovery was 96.88% ~ 99.25%，and the RSDs were 1.94% ~ 2.47%.Conclusion In this experiment，
the TLC method for THT was established to identify orientin，isoorientin，vitexin，vitexin-2-0-rhamnoside and isovitexin in
the THT;UV-Vis was used to deter^nine the content of total flavonoids，and HPLC Methods was used to deter^nine the con?tent of 8 components in the THT，which provided a reference for the quality control of
words ：Tetrastigma hemsleyanurn Tablets;
Quality standard;Thin-layer identification;Deter^mination三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤
(Tefrastigma hemsle;yan>um Diels et Gilg),别名金钱吊
1.2试药牡荆素（批号:MUST-160308)、异牡荆
素（批号：MUST- 150711 )、荭草苷（批号：MUST -
葫芦，全草均可人药[1-2],其地下块根又名蛇附
子[3]。近年来,关于三叶青的现代药理作用研究较
多，其在抗肿瘤[4]、抗炎[5]、抗氧化[6]、降脂[7]、保
肝[8]等方面都显示出了良好的作用,并且现代化学
研究表明三叶青中的黄酮类成分是主要的活性成
分[9],且具有良好的安全性[9]，黄酮类成分被作为
三叶青质量评价的重要指标性成分[10-14]。近年来关于三叶青开发利用上,三叶青制剂多
为汤剂或散剂[15-17],但汤剂存在需临用前煎煮制
备、药液味苦、量大、散剂未经提取纯化口服量大等
缺点。中药片剂具有剂量准确、质量稳定、生产成本
低、服用和贮运方便等优点，课题组前期针对三叶青
开展了其片剂工艺的研究，制备得到的三叶青片
剂[18-19],但对三叶青片剂的质量控制尚未建立，也
未见文献关于三叶青片剂的质量评价研究。为了更好地控制三叶青片剂质量，本研究根据
《中国药典》2015年版（四部）制剂通则中片剂项下
规定对其进行片重差异、崩解时限及硬度检查，利用
薄层色谱鉴别其主要黄酮成分，采用紫外分光光度
法测定其总黄酮的含量，并采用高效液相色谱测定
三叶青片剂中8个主要成分的含量,建立三叶青片
剂的质量标准，为三叶青片剂的开发利用提供参考。
1仪器与试药1.1仪器安捷伦1290高效液相色谱仪（安捷伦
公司）；Sephadex LH-20 (Pharmacia Biotech 有限公
司）；CPA225D型十万分之一分析天平（德国
Sartorius公司）；KQ-500E台式超声波清洗器（昆山
市超声仪器有限公司）；UV-1800紫外分光光度计
(日本岛津公司）；TDP-1.5单冲压片机TDP-1.5
(上海超亿制药机械设备有限公司）；LB-2D型崩解
时限测定仪（上海黄海药检仪器厂）；YD-200B片
剂硬度测定仪(上海铭翔药检仪器有限公司）；硅胶
G预制薄层板（青岛海洋化工厂分厂，批号:
20180612)。130705)、异荭草苷（批号：MUST-131009)、牡荆素
鼠李糖苷（批号：MUST- 130506)、绿原酸（批号:
MUST-327979)、新绿原酸（批号:MUST-906332)和
隐绿原酸（批号:MUST-905997)均购自成都曼思特
生物科技有限公司，HPLC纯度均為98%。树脂
HP20(日本三菱公司），聚维酮K30(PVP-K30)、乳
糖、微晶纤维素（MCC)、硬脂酸镁、羧甲基淀粉钠
(CMS-Na)、交联聚维酮（PVPP)均为药用级（安徽
山河药用辅料股份有限公司）。甲醇、乙腈、甲酸均
为色谱纯（Merck公司）；三乙胺为色谱纯（阿拉丁试
剂上海有限公司），水为Milli-Q Direct 16超纯水机
制备（Millipore公司）。三叶青由宁化县益珍农业科
技有限公司提供，经福建中医药大学药学院药用植
物实验室范世明正高级实验师鉴定为葡萄科崖爬藤
属植物三叶崖爬藤（Tefrastigma hemsle;yan_um Diels et
Gilg)的全草，药材存放于福建中医药大学药学院标
本2室。方法与结果2.1三叶青片剂制备依据课题组前期对三叶青
提取、纯化和制剂工艺考察[18-19]，简述如下:三叶青
药材3 000 g，经粉碎机粉碎，过40目筛，得三叶青
粉，备用。将三叶青粉置于多功能提取罐中，加人
20倍量70%乙醇，回流提取90 min，提取2次，合并
滤液浓缩到生药计1 g ? mL-1的浓缩液。取HP20
树脂，以径高比1 : 5装柱,取三叶青浓缩液按照0.5
g生药/g树脂上样量上样后，静置1 h，以流速6
BV ? h-1(BV为树脂床体积）的超纯水进行除杂，用
量为4 BV。采用50%乙醇4 BV，以流速2 BV ? h-1
进行富集洗脱，收集富集液浓缩，冷冻干燥24 h，平
行制备3批三叶青剂冻干粉。按照三叶青片剂制
备,按照处方比例，三叶青冻干粉：填充剂=1 : 2,
填充剂为微晶纤维素：乳糖=1 : 1.5,内加5%主药
量的崩解剂PVPP : CMS-Na=1 : 1，加人5%主药
量的用85%乙醇配制的3%PVP K30黏合剂，以
?
178 ?药学研究? Journal of Pharmaceutical Research 2021 Vol.40，No.385%乙醇为润湿剂，“握之成团，轻捏即散”软材于
20目筛制粒，置于60 °C烘箱干燥、整粒，加入润滑
剂硬脂酸镁为颗粒量的0.6%，压制成片，即得3批三叶青片剂各1 000片（每片折算生药约3 g)。2.2性状3批次三叶青片剂均为棕色片，味微
苦，表面光滑，色泽均匀，见图1。图1三叶青片剂外观性状2.3片剂项下的检查[20]2.3.1片重差异根据《中国药典》2015年版（四
部）制剂通则中片剂项下重量差异的检查方法进行
检查，3批次的三叶青片剂平均片重分别为0.455 1、
0.453 0、0.454 7 g，重量差异均在±5%内，符合规定。
2.3.2崩解时限按照《中国药典》2015年版（四
部）崩解时限检查法进行检查，3批三叶青片剂崩解
时限均在15 min内，符合《中国药典》规定。2.3.3硬度检查片剂应具有适宜硬度，3批三叶
青片剂的平均硬度为26?27 N，硬度符合规定。2.4薄层鉴别2.4.1供试品溶液取3三叶青片剂适量，研细，
称取约0.5 g，精密称定，置具塞三角瓶中，加25 mL
甲醇超声处理（功率250 W，频率50 kHz)30 min，放冷，滤过得供试品溶液。2.4.2对照品溶液取牡荆素、异牡荆素、荭草苷、
异荭草苷及牡荆素鼠李糖苷对照品适量，精密称定，
加入甲醇制成浓度分别为0.465、0.429、0.414、
0.499、0.445 mg ? mLl勺单一对照品溶液，分别取各
单一对照品溶液1 mL置于5 mL量瓶中，摇匀即得
混合对照品溶液。2.4.3鉴别方法与结果分别吸取荭草苷、异荭草
苷、牡荆素、牡荆素鼠李糖苷、异牡荆素对照品溶液
各2.0 pL，混合对照品溶液5 pL，供试品溶液各2.0
吣和5.0吣点于同一硅胶G薄层板上（青岛海
洋），以乙酸乙醋：甲酸：甲苯：水=8:1:1:1
为展开剂系统展开（温度26 C，湿度65%)，取出晾
干，喷以3% A1C13显色剂，于105 C下加热5 min，
365 nm紫外灯下检视。结果表明三叶青片剂供试
品薄层色谱中与荭草苷、异荭草苷、牡荆素、牡荆素
鼠李糖苷、异牡荆素对照品同一位置上呈现相同颜
色的清晰斑点，阴性空白（单纯辅料片剂）无干扰，2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 131.荭草苷;2.异荭草苷;3.牡荆素;4.牡荆素鼠李糖苷；5.异牡荆素；6、_ZS001(5、2
pL);7、_
ZS002(5、2
pL);8、_ZS003(5、2
pL);9.混合对照品溶液;13.阴性空白图2三叶青片剂5个黄酮类成分薄层色谱图结果见图2。2.5三叶青片剂总黄酮含量测定
2.5.1供试品溶液制备取三叶青片剂适量，研
细，称取约0.05 g，精密称定，置具塞三角瓶中，加25
mL甲醇超声处理（功率250 W，频率50 kHz) 30
min，放冷，滤过得供试品溶液。另取等量空白片剂
制备空白阴性溶液。2.5.2对照品溶液制备精密称取牡荆素对照品22.2 mg，加入适量甲醇制得浓度1.10 mg ? mL-1的
对照品储备液，进一步用甲醇稀释制成浓度46.25
pg mL-1的对照品溶液。2.5.3显色方法及检测波长的选择参考课题组
之前建立的三叶青总黄酮测定方法[13]，精密吸取牡
荆素对照品5 mL于25 mL的容量瓶中，加甲醇至6
mL，加1%三乙胺定容至刻度，摇勻，显色30 min。
精密吸取供试品溶液1 mL于25 mL的容量瓶中，加
甲醇至6 mL，加1%三乙胺定容至刻度，摇匀，显色
药学研究? Journal of Pharmaceutical Research 2021 Vol.40 ,No.3?
179 ?30 min。对照品和供试品溶液均以显色剂作为空白
对照。在300-500 nm范围内进行扫描。结果显
示，对照品与供试品溶液在400 nm处有相同吸收
峰，故选择400 nm作为检测波长，见图3。瓶中，按“2.5.3”项下方法显色后测定吸光度，平行6
份。结果该方法平均加样回收率为98.43%，50为
2.46%，见表 1。表1加样回收率试验图3牡荆素（1)和供试品（2)的紫外光谱图谱2.5.4线性关系考察精密吸取“2.5.2”项下的牡荆
素对照品各1、2、3、4、5、6 mL于25 mL容量瓶中，加
甲醇至6 mL，按“2.5.3”项下方法显色测定吸光度，以
对照品溶液的浓度与吸光度值建立标准曲线，得线性
回归方程4 = 0.048 4C-0.022 4，= 0.999 3。结果表
明，在1.85-11.10网mL-1范围内线性关系良好。
2.5.5精密度试验精密移取对照品溶液5 mL，供
试品溶液1 mL，分别置于25 mL容量瓶中，加甲醇
至6 mL，按“2.5.3”项下方法显色测定吸光度，在同
一紫外分光光度计上连续测定6次，结果对照品溶
液和供试品溶液及分别为0.03%、0.10%，表明试
验精密度良好。2.5.6稳定性试验精密移取对照品溶液5 mL，供
试品溶液1 mL，分别置于25 mL容量瓶中，加甲醇
至6 mL，按“2.5.3”项下方法显色后分别在0、8、15、
30、60、90、120、240 min测定吸光度。结果表明，对
照品和供试品显色产物在室温下30-240 min内稳
定，及分别为0.67%、2.54%。2.5.7重复性试验精密称取批号为SYQP_ZS001
的三叶青片剂6份，按“2.5.1”项下方法制成供试品
溶液，精密吸取1 mL，置于25 mL容量瓶中，按
“2.5.3”项下方法显色后测定吸光度，计算含量，结
果该批次的三叶青片剂中总黄酮含量平均为117.48
mg ? g-1，似D为2.57%，说明重复性良好。2.5.8加样回收试验取重复性试验同批三叶青
片剂（SYQP_ZS001)0.025 g，精密称定，加人近似样
品总黄酮含量的对照品量（1 : 1)，按“2.5.1”项下方
法制成供试品溶液。精密吸取1 mL置于25 mL量供试品取供试品中黄加人量测得量回收率平均回样量/g酮含量/mg/mg/mg(%)收率（％)0.025 12.9493.36.21699.00.025 42.9843.36.331101.40.025 22.9603.36.21398.60.025 42.9843.36.11895.098.430.025 32.9723.36.15196.30.025 22.9603.36.271100.32.5.9样品含量测定精密吸取“2.5.1”项下的3
批次供试品溶液各1 mL，分别置于25 mL容量瓶
中，按“2.5.3”项下显色后测定吸光度，计算得制备
的3个批次的三叶青片剂中总黄酮含量分别为
117.48、124.02、112.56 mg ? g-1。2.6 HPLC-DAD测定三叶青片剂8个成分的含量2.6.1 色谱条件采用Welch Ultimate XB-C18色谱
柱(4.6 mmx150 mm，2.7 pm);流动相为 0.1% 甲酸
水（A)-乙腈（B)，流速0.4 mL min-1，柱温30 °C，进
样量:5 叫，梯度洗脱:98%A(0~5 min)，98%A—
90%A( 5 ~ 15 min)，90% A —^88% A ( 15 ~ 30 min)，
88%A—80%A(30~50 min)，80%A—98%A (50~65
min);检测波长330 nm，对照品和供试品溶液中8
个成分理论塔板数均大于5 000,色谱分离良好，阴
性无干扰（见图4)。1.新绿原酸;2.绿原酸;3.隐绿原酸;4.异荭草苷;5.荭草苷;6.
牡荆素鼠李糖苷;7.牡荆素;8.异牡荆素图4混合对照品（A)和供试品（B)色谱图
?
180 ?药学研究? Journal of Pharmaceutical Research 2021 Vol.40，No.32.6.2供试品溶液的制备取“2.5.1”项下制备的
3批次供试品溶液。2.6.3对照品溶液的制备取新绿原酸、绿原酸、隐
绿原酸、异荭草苷、荭草苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、
异牡荆素对照品适量，精密称定，加人甲醇制备浓度
分别为 1.273、1.15、1.092、0.66、0.593 6、0.318、0.596 8、
0.599 6 mg mL-1的对照品储备液，进一步用甲醇稀释
制备浓度为 127.30、115.00、109.20、66.00、59.36、31.80、
59.68、59.96吨mL-1的混合对照品溶液。2.6.4线性和范围精密吸取“2.6.3”项下制备的
2.6.9样品含量测定取“2.5.1”项下供试品溶液,
进样5 ^L，测定峰面积，根据标准曲线计算其含量，
结果见表 4。表3 8个待测物的加样回收率试验结果化合物样品称量/g0.025 40.0.025 1新绿原酸0.025 30.025 00.025 1样品中
含量/mg0.271 80.267 50.268 60.270 70.267 50.268 6加入量/mg0.254 60.254 60.254 60.254 60.254 60.254 6测得量/mg0.529 30.518 10.523 50.529 50.516 20.514 1回收率(%■)101.198.4100.1101.697.796.499.24平均回收率(％.)混合对照品溶液，用50%甲醇分别稀释制备得到梯
度浓度的混合对照品溶液，精密吸取5 ^L进样，并
测定峰面积,以浓度X(Ag ? mL-1)对峰面积:F进行
线性回归，得回归方程和相关系数，并稀释不同浓度
对照品得各个化合物的定量限（S/N为10)和检测
限（S/N为3)，结果见表2。2.6.5精密度试验精密吸取同一份对照品混合溶
液5 +L，—天内连续进样6次，连续进样3 d，记录8
个成分的峰面积,其峰面积日内精密度和日间精密度
的范围均在1.39%?2.01%，表明精密度良好。表2 8个待测物的回归方程、线性范围及定量限和检出限化合物 回归方程相关系数线性范围 定量限 检测限
r/>g ?
mL-1/>g ?
mL-1/>g ?
mL-1新绿原酸y二36.97U.900.999 912.73?127.301.270.385绿原酸 ^ 35.23X+8.640.999 911.50?115.001.150.348隐绿原酸
r二 35.37X+4.530.999 910.92?109.21.090.330异荭草苷y二32H+1.310.999 96.60?66.001.100.333荭草苷33.3壯-0.290.999 95.93?59.361.1860.359牡荆素鼠李糖苷y, 34 941-1920.999 73.18?31.801.060.321牡荆素
y: 41.071-4.270.999 95.97?59.681.190.362异牡荆素y: 43.0从-1.990.999 95.99?59.961.200.3632.6.6稳定性试验制备一份供试品，取该供试品
溶液分别于0、2、4、6、10、12和24 h进样分析，记录
8个成分的峰面积，其峰面积的KSfl范围均在
0.86%?1.46%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.6.7重复性试验精密称取同一批三叶青样品6
份,制备成供试品溶液进样测定峰面积，计算8个成
分的含量,其含量KSfl范围均在1.39%?2.94%，表
明方法重复性良好。2.6.8加样回收率试验精密称取已知含量的样
品（SYQP_ZS001)0.025 g，平行6份,精密加人近似
1 : 1的8个对照品，制备成供试品溶液进样测定峰
面积，计算含量，见表3,得到平均回收率为96.88%
?99.25%，KSD 为 1.94?2.47%。0.025 41.239 81.152.387 099.80.025 01.220 31.152.340 897.4绿原酸0.025 11.225 11.152.361 098.80.025 31.234 91.152.403 6101.698.350.025 01.220 31.152.336 397.00.025 11.225 11.152.323 095.50.025 40.158 20.163 80.318 297.70.025 00.155 80.163 80.314 696.9隐绿原酸…..0.025 10.156 40.163 80.318 398.80.025 30.157 60.163 80.324 7102.097.840.025 00.155 80.163 80.314 096.60.025 10.156 40.163 80.312 095.00.025 40.620 50.661.280 7100.00.025 00.610 80.661.261 898.6异荭草苷0.025 10.613 20.661.272 599.90.025 30.618 10.661.280 5100.498.600.025 00.610 80.661.256 897.90.025 10.613 20.661.238 794.80.025 40.134 10.118 720.251 699.00.025 00.132 00.118 720.248 197.80.025 10.132 50.118 720.246 796.2荭草苷0.025 30.133 60.118 720.250 998.896.880.025 00.132 00.118 720.245 295.40.025 10.132 50.118 720.244 394.20.025 40.168 40.1590.329 0101.00.025 00.165 80.1590.323 098.9牡荆素鼠0.025 10.16640.1590.324 099.1李糖苷0.025 30.167 70.1590.3268100.198.510.025 00.165 80.1590.321 698.00.025 10.16640.1590.315994.00.025 40.530 40.596 81.130 2100.50.025 00.522 00.596 81.109 298.40.025 10.524 10.596 81.106 697.6牡荆素0.025 30.528 30.596 81.122 399.598.100.025 00.522 00.596 81.104 297.60.025 10.524 10.596 81.091 095.00.025 40.18970.179 880.371 7101.20.025 00.18680.179880.364 999.0异牡荆素0.025 10.187 50.179880.362 497.20.025 30.18900.179880.366 798.898.050.025 00.18680.179880.361 697.20.025 10.187 50.179880.358 294.9
药学研究? Journal of Pharmaceutical Research 2021
表批号Vol.40，No.3?
181 ?4三[叶青片剂中8个待测物的含量（mg ?g-1)和异荭草苷，8个成分的总和达到124.66 ~ 139.17mg ? g-1。本文研究了三叶青片剂的质量标准，通过性状、
片重差异、崩解时限及硬度检查对三叶青片剂进行
检查，符合《中国药典》2015年版（四部）制剂通则
中片剂项下规定;采用薄层色谱法鉴别三叶青片剂
中5种黄酮成分（异荭草苷、荭草苷、牡荆素鼠李糖
苷、牡荆素、异牡荆素），用紫外分光光度法测定三
叶青片剂总黄酮含量, 采用高效液相色谱法测定三
叶青片剂中8个主要成分含量，为三叶青片剂的质
新绿绿原隐绿异荭荭草牡荆素鼠牡荆异牡8个成原酸酸原酸草苷苷李糖苷素荆素分合计10.7048.816.2324.435.2811.4252.066.6626.065.6410.2446.685.9423.315.056.637.096.3320.887.4722.307.9620.077.14130.43139.19124.76SYQP_ZS001SYQP_ZS002SYQP_ZS0033讨论3.1薄层鉴别条件的优化在考察不同点样量的试
验过程中,发现点样量为5.0 +L时，斑点较大，拖尾
严重，供试品不易分离;点样量为2.0 +L时,分离效
果较好，斑点清晰。在考察不同展开剂的试验过程
中，发现分离5种黄酮成分，使用展开剂为
乙酸乙酯：甲酸：甲苯：水=10 : 1 : 1 : 1或乙酸乙
酯：甲酸：甲苯：水=8 : 1.2 : 1 : 1时，斑点不易分
离，拖尾，以乙酸乙酯：甲酸：甲苯：水=
8 : 1 : 1 : 1为展开剂时，斑点清晰，分离较好。在考
察使用不同显色剂显色时发现，使用10%硫酸-乙醇
显色黄酮成分时，斑点不灵敏，用3%AICI3溶液显色
斑点清晰，因此选择3%AICI3溶液作为显色剂。另
外，三叶青中还有含量较高的绿原酸、隐绿原酸和新
绿原酸的，其鉴别采用乙酸乙酯：甲酸：甲苯：水=
17 : 2 : 2 : 0.8为展开剂系统,发现可以较好地区分
绿原酸,但是新绿原酸和隐绿原酸分离不好,暂时不
列人标准。3.2总黄酮含量测定紫外分光光度法测总黄酮
含量时，常用方法有NaN02-Al(N03)3-Na0H法、
A1C13-KAc法和三乙胺法显色法[|3],用NaN02-Al
(N03)3-Na0H法和A1C13-KAc法，发现牡荆素成
分在光谱上均未见明显红移,而采用三乙胺显色法
测定时，牡荆素和供试品在波长400 nm下均有最大
吸收波长，特异性较好,显色条件经优化采用1%三
乙胺，显色时间为30 min即可稳定。3.3色谱条件的优化用高效液相色谱测定三叶
青片剂中8个主要成分，在选择色谱柱时，通过比较
不同厂家不同粒径色谱柱分离效果，最终选择
Welch UHPLC Ultimate XB-C18色谱柱（4.6 mmx150
mm,2.7 pm)。在选择流动相系统时,通过比较不同
的流动相系统:乙腈-0.1%甲酸水，甲醇-0.1%甲酸
水，乙腈-水，甲醇-水。试验结果表明，使用乙腈-
0.1%甲酸水为流动相,8个成分的分离度最好。且
在光谱扫描中，在330 nm下,8个成分均有最大吸
收波长，因此选择330 nm下检测，经过含量测定发
现3个批次三叶青片剂中，含量最高的成分为绿原
酸，含量达到46.68~52.06 mg ? g-1,其次是牡荆素
和异荭草苷，含量均大于20 mg ? g-1,其次是牡荆素量控制与研究开发提供试验依据。致谢：感谢澳门大学中华医药研究院陆金健博
士课题组对三叶青制剂及质控合作研究中的协助。
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制造工艺：CN104706835B[P].2019-03-08.[17]陈小林，赵敏，胡基埂，等.一种高活性直接口服三叶青
微粉的制造工艺：CN104706835A[ P] .2015-06-17.[18 ]许文，范世明，徐惠龙，等.一种三叶青总酚类的提取及
纯化方法：CN108853274A [ P] .2018-11-23.[19]
许文，范世明，徐惠龙，等.一种三叶青片剂及其制备方
法：CN108837041A [ P] .2018-11-20.[20]
国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版（四部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015.《药学研究》关于抵制学术不端行为的声明捏造与篡改数据、抄袭剽窃、重复发表、虚假署名、一稿多投等学术不端行为
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