常见缓冲溶液配制

2023年12月17日发(作者：老款标致307颜色大全)

实验室常用缓冲液配置方案

1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度：1 M Tris-HCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

PH值

7.4

7.6

8.0

浓HCl

约70ml

约60ml

约42ml

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA

配制量：1 L

配制方法：

1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。

1M Tris－HCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0） 100ml

500mM EDTA(PH8.0) 20ml

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。

3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。

4. 室温保存。

3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)

组份浓度：1.5 M Tris-HCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

4)3 M 醋酸钠(pH5.2)

组份浓度：3M 醋酸钠

配制量：100ml

配制方法：

1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解

2.加入冰醋酸调节pH值至5.2

3.加去离子水将溶液定容至100ml 4高温高压灭菌后，室温保存。

5)PBS Buffer

组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4

配制量：1 L

配制方法：

1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

NaCl

KCl

Na2HPO4

KH2PO4

8g

0.2g

1.42g

0.27g

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

4. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM

MgCl2。

6)10 M 醋酸铵

组份浓度：10 M 醋酸铵

配制量：100 ml

配制方法：

1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。

4. 密封瓶口于室温保存。

注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7)苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)

配制方法：

1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

8）10％ (W/V) SDS

组份浓度：10％ (W/V)SDS

配制量：100ml

配制方法：

1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解

2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2

3.将溶液定容至100ml后，室温保存。

9）2 N NaOH

组份浓度：2 N NaOH

配制量：100 ml

配制方法：

1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。

2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。 3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。

4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

10）2.5 N HCl

组份浓度：2.5 N HCl

配制量：100 ml

配制方法：

1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N)，均匀混合。

2. 室温保存。

11）5 M NaCl

组份浓度：5 M NaCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。

3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

11）20％ (W/V) Glucose

组份浓度：20％ (W/V) Glucose

配制量：100 ml

配制方法：

1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

12）Solution I(质粒提取用)

组份浓度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose

配制量：1 L

配制方法：

1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。

1M Tris-HCl（PH8.0） 25ml

0.5M EDTA（PH8.0） 20ml

20％Glucose（1.11M） 45ml

dH2O 910ml

2. 高温高压灭菌后，4℃保存。

3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。

13）Solution II(质粒提取用)

组份浓度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS

配制量：500ml

配制方法：

1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中

10％ SDS 50ml

2N NaOH 50ml

2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀

3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月

注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌

14）Solution III(质粒提取用) 组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH

配制量：500 ml

配制方法：

1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。

KOAc

CH3COOH

147g

57.5ml

2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。

4. 高温高压灭菌后，4℃保存。

15）0.5 M EDTA(pH8.0)

组份浓度：0.5 M EDTA

配制量：1 L

配制方法：

称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。

3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。

注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4. 加去离子水将溶液定容至1 L。

5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。

6. 室温保存。

16）1 M DTT

组份浓度：1 M DTT

配制量：20 ml

配制方法：

1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。

2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。

3. 适量分成小份后，-20℃保存。

17）10 mM ATP

组份浓度：10 mM ATP

配制量：20 ml

配制方法：

1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。

2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。

3. 适量分成小份后，-20℃保存。

一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，

须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇

至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹

或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）

5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）

2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂（Denhardt\'s regent）

成分及终浓度

2％聚蔗糖（Ficoll，400型）

2％聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）

2％BSA（组分V）

水

配制100ml溶液各成分的用量

2g

2g

2g

加水至总体积为100ml

依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）

成分及终浓度

0.5mol/L Tris-HCl

配制10ml溶液各成分的用量

5ml 1mol/L 贮液 100mmol/L MgCl2

100mmol/L DTT

2mmol/L ATP

5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）

0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）

水

1ml 1mol/L 贮液

1ml 1mol/L 贮液

200ul 100 mmol/L 贮液

50ul 1 mmol/L 贮液

0.5ml 10 mg/mL 贮液

2.25ml

将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。

100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）

可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/L dNTP混合液

成分及终浓度

10mmol/L dATP

10mmol/L dCTP

10mmol/L dGTP

10mmol/L dTTP

水

20％PEG 8000/2.5M NaCl

成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量

20g

质量浓度为20％聚乙二醇

50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化2.5mol/L 氯化钠

钠

水

补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC

成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L 柠檬酸三钠（二88.2g

水）

175.3g

3mol/L 氯化钠

补足1L

水

溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水

加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionized formamide）

直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphate buffer）

按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）配制20ul溶液各成分的用量

2ul 100 mmol/L dATP 贮液

2ul 100 mmol/L dCTP 贮液

2ul 100 mmol/L dGTP 贮液

2ul 100 mmol/L dTTP 贮液

12ul 贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L 磷酸二氢钠（ml） 1mol/L 磷酸氢二钠（ml） 最终 pH值

877

850

815

775

735

685

625

565

510

450

390

330

280

成分及终浓度

10mmol/L Tris－HCl

1mmol/L EDTA

水

123

150

185

225

265

315

375

435

490

550

610

670

720

6.0

6.1

6.2

6.3

6.4

6.5

6.6

6.7

6.8

6.9

7.0

7.1

7.2

配制100ml溶液各成分的用量

1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）

200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

98.8ml

TE（用于悬浮和贮存DNA）

Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）

将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml）

8.6

14

21

28.5

38

46

56

66

71.3

76

二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度

2mol/L Tris碱

1mol/L 乙酸

100 mmol/L EDTA

水

配制1L溶液各成分的用量

242g

57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）

200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

补足1L

pH

9.0

8.8

8.6

8.4

8.2

8.0

7.8

7.6

7.4

7.2 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度

445 mmol/L Tris碱

445 mmol/L 硼酸盐

10 mmol/L EDTA

水

配制1L溶液各成分的用量

54g

27.5g 硼酸

20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

补足1L

染料

1％溴酚蓝（bromophenol blue）

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）

溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）

小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液（gel loading solutions）

6×碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

0.3 N 氢氧化钠

6 mmol/L EDTA

18％聚蔗糖（400型）

0.15％溴甲酚绿

0.25％二甲苯青FF

水

6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5 mmol/L EDTA

15％聚蔗糖（400型）

水

成分及终浓度

0.25％溴酚蓝

0.25％二甲苯青FF

15％聚蔗糖（400型）

水

6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）

成分及终浓度

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5 mmol/L EDTA

50％甘油

水

6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

配制10ml溶液各成分用量

300ul 10N 氢氧化钠

120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

1.8g

15mg

25mg

补足到10ml

配制10ml溶液各成分用量

1.5ml 1％溴酚蓝

1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

1.5g

补足到10ml

配制10ml溶液各成分用量

2.5ml 1％溴酚蓝

2.5ml 1％二甲苯青FF

1.5g

补足到10ml

配制10ml溶液各成分用量

1.5ml 1％溴酚蓝

1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

3ml

3.9ml

6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5 mmol/L EDTA

40％聚蔗糖

水

成分及终浓度

0.2％溴酚蓝

0.2％二甲苯青FF

200 mmol/L EDTA

0.1％SDS

50％甘油

水

三.常用培养基

LB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

酵母提取物

氯化钠

配制10ml溶液各成分用量

1.5ml 1％溴酚蓝

1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

4g

补足到10ml

配制10ml溶液各成分用量

20mg

20mg

4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)

100ul 10％ SDS

5ml

补足到10ml

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

10g

5g

10g

如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

SOB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

酵母提取物

氯化钠

1 mol/L 氯化钾

20g

5g

0.5g

2.5ml

用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

SOC培养基

成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

TB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

酵母提取物

甘油

12g

24g

4ml

各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L

K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。 2×YT培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

酵母提取物

氯化钠

16g

10g

4ml

如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

YPD培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

酵母提取物

葡萄糖

20g

10g

20g

用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素

氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）

溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）

溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）

溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）

溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素（streptomycin）（50mg/ml）

溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）

溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素（tetracyyline）（10mg/ml）

溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。