苦参碱衍生物ZS10基于PI3KAKT信号通路诱

2023年12月21日发(作者：马自达323多少钱)

·１１６·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３Ｊａｎ；３９（１）：１１６～２４网络出版时间：２０２２－１２－０９１７：５９：０７　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／／３４．１０８６．Ｒ．２０２２１２０９．１４２８．０２６．ｈｔｍｌ

苦参碱衍生物ＺＳ１０基于ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ信号通路诱导人肝癌细胞ＢＥＬ?７４０２凋亡王　湘，张　森，韩科研，曾攀科，李雪娇，王立升（广西大学医学院，广西南宁５３０００４）ｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２１１１０８２文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０１－０１１６－０９中国图书分类号：Ｒ２８４?１；Ｒ３２９?２５；Ｒ３４５?５７；Ｒ７３５?７；Ｒ９７９?１摘要：目的　探讨新型苦参碱衍生物ＺＳ１０抑制ＢＥＬ?７４０２细胞增殖，诱导细胞凋亡的信号通路。方法　采用有机合成的Ｓ１０；采用ＭＴＴ法，分析在作用时间分别为２４、方法，合成Ｚ４８、７２ｈ时，ＺＳ１０对ＢＥＬ?７４０２细胞增殖的抑制作用，计算ＩＣ；采用ＤＡＰＩ染色法，观察ＢＥＬ?７４０２细胞状态；采用克隆５０ＥＬ?７４０２细胞集落形成情况；采用流式细胞仪形成法，观察Ｂ观察ＢＥＬ?７４０２细胞周期阻滞情况和凋亡情况；采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测ＰＩ３Ｋ?ＡＫＴ通路及相关蛋白表达水平。结果　获Ｓ１０，并进行了结构表征；ＭＴＴ结果表得新型苦参碱衍生物Ｚ明，ＺＳ１０作用于ＢＥＬ?７４０２细胞４８ｈ，ＩＣ６?６２±１?１１）５０为（－１ｍｏｌ·Ｌ；ＤＡＰＩ染色结果表明，给药浓度升高，细胞核发生μ　　原发性肝癌是人类消化系统最常见的癌症之一，在我国为高发癌症，具有恶性程度高、复发率１］高、转移率高的特点［。临床治疗多采用手术、放疗、化疗以及免疫疗法。虽然随着酪氨酸激酶抑制剂的出现，患者的存活率得到了很大改善，但仍然伴２－３］有新的问题，如耐药性问题等［。因此，研发能够有效地抑制肝癌细胞增殖和转移的新型化学药物，克服其耐药性，具有重大意义。ＡＫＴ是一种在人类癌症中通常被激活的丝氨酸／苏氨酸激酶，被认为与细胞增殖、转移、凋亡和癌４］，ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ信号通路通过调节多种与细变有关［５］。胞相关的通路，在肿瘤发生中发挥重要作用［ＡＫＴ激活后，能够转移至细胞核和细胞质，同时激活细胞增殖、转移、周期、凋亡相关靶点，这些机制不是孤立的，可能在肿瘤发生过程中共存。因此，ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ可能是肝癌治疗的关键部位。苦参碱（Ｍａｔｒｉｎｅ，Ｆｉｇ１）是豆科植物苦参（Ｓｏｐｈｏ?ｒａｆｌａｖｅｓｃｅｎｓＡｉｔ．）、苦豆子（Ｓ．ａｌｏｐｅｃｕｒｏｉｄｅｓＬ．）等中草药活性成分的单体提取物，其化学式为Ｃ１５Ｈ２４ＮＯ，具有喹诺里西啶结构。已经上市的复方苦参２注射液作为一种抗癌药物，可与其它抗癌药物联合３，６－８］治疗肝癌和非小细胞肺癌［。临床研究表明，将ＺＳ１０明显抑制ＢＥＬ?７４０２细明显改变；克隆形成结果表明，胞的集落形成；流式细胞术结果表明，ＺＳ１０诱导ＢＥＬ?７４０２细胞凋亡并阻滞Ｓ期。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，ＺＳ１０在浓度－１为０～８μｍｏｌ·Ｌ时，对ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ通路及其相关蛋白具有Ｉ３Ｋ、调节作用，并呈剂量依赖性。与对照组比较，给药组ＰＡＫＴ、ｐ?ＡＫＴ和抗凋亡蛋白Ｂｃｌ?２的表达水平均明显降低，促ａｘ表达水平均明显升高，周期蛋白ＣｙｃｌｉｎＤ１和凋亡蛋白ＢＣＤＫ２表达水平均明显降低，迁移蛋白ＥＧＦＲ、Ｎ?ｃａｄｈｅｒｉｎ、Ｖｉ?表达降低，Ｅ?ｃａｄｈｅｒｉｎ表达升高。结论　ＺＳ１０对肝癌ｍｅｎｔｉｎ细胞ＢＥＬ?７４０２的生长、增殖具有抑制作用。关键词：苦参碱衍生物ＺＳ１０；ＢＥＬ?７４０２细胞；迁移；周期；凋亡；ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ信号通路标准疗法与苦参碱联合使用，癌症患者的生活质量９－１０］和免疫功能得到了极大的改善［。由于苦参碱具有良好的溶解性、安全性和柔韧性结构，已被认为１１］是一种理想的先导化合物［。苦参碱衍生物ＺＳ１０开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：（Ｆｉｇ１），具有较好的体外抗肿瘤活性。本文报道了ＺＳ１０的合成，以及ＺＳ１０对ＢＥＬ?７４０２细胞增殖，周期和凋亡的影响，基于ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ通路对相关蛋白进行了初步研究，为ＺＳ１０进一步开发成为临床药物奠定了基础。１　材料１．１　细胞株　人肝癌细胞ＢＥＬ?７４０２，人正常肝细Ｏ２由广西中药药效研究重点实验室提供。胞Ｌ１．２　药品与试剂　苦参碱为陕西昂盛生物医药公司产品；二氯甲醚、无水四氯化锡、１?氟萘均为萨恩化学技术（上海）有限公司产品；乙酸乙酯、石油醚、收稿日期：２０２２－０８－１６修回日期：２０２２－１０－２３基金项目：中央引导地方科技发展专项（Ｎｏ桂科ＺＹ２１１９５０１２）１９９７－），男，硕士生，研究方向：药理学，Ｅ?ｍａｉｌ：作者简介：王　湘（ｗａｎｇｘｉａｎｇ１２０３１２＠１６３．ｃｏｍ；王立升（１９６５－），男，博士，教授，博士生导师，研究方向：新药设计与开发、天然产物提取分离及结构改造、药理学，通信作者，Ｅ?ｍａｉｌ：ｌｓｗａｎｇ＠ｇｘｕ．ｅｄｕ．ｃｎCopyright?博看网. All Rights Reserved.

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３Ｊａｎ；３９（１）·１１７·

ＰＩ／Ｒｎａｓｅ）细胞周期试剂盒为上海拜酶染色缓冲液（力生物科技有限公司生产；膜联蛋白?Ｖ／碘化丙啶（ＡｎｎｅｘｉｎⅤ?ＦＩＴＣ／ＰＩ）细胞凋亡试剂盒为上海拜力生物科技有限公司生产。１．３　主要仪器　高内涵细胞成像分析系统（美国ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司）；高通量酶标仪筛选系统（美国ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司）；高速离心机（湖南湘仪实验仪器开发有限公司；倒置显微镜（ＯＬＹＭＰＵ奥林巴斯公司）；生物安全柜（Ｔｈｅｒｍｏ）；细胞计数仪（Ｂｉｏ?Ｒａｄ公ｉｎｄｅｒ公司）；ＡｔｔｕｎｅＮｘＴ流司）；细胞培养箱（德国Ｂ式细胞仪（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。Ｆｉｇ１　ＴｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｆｏｒｍｕｌａｏｆｍａｔｒｉｎｅａｎｄｉｔｓｄｅｒｉｖａｔｉｖｅＺＳ１０２　方法２．１　化学合成　将１０ｇ（１００ｍｍｏｌ）２，２，２?三氟乙４?３ｇ（１４０ｍｍｏｌ）三乙胺溶于无水１２０ｍＬ乙醇和１醚中。在室温下加入适量１７?２ｇ（９０ｍｍｏｌ）甲苯磺酰氯。搅拌混合物约４８ｈ，直到甲苯磺酰氯完全反应。过滤，用３０ｍＬ×２乙醚洗涤滤饼。将滤液浓缩。用硅胶柱层析法，正己烷∶乙醚＝９∶１为洗脱剂，得２，２，２?三氟乙基?４?甲基苯磺酸酯。　　氮气保护，将３４ｇ（２３６ｍｍｏｌ）１?萘酚、４０ｇ（１５７ｍｍｏｌ）２，２，２?三氟乙基对甲苯磺酸酯、３３ｇ（２４０ｍｍｏｌ）碳酸钾和８０ｍＬ二甲基亚砜的悬浮液，１００℃加热搅拌１２ｈ。冷却后，加入１００ｍＬ水和２００ｍＬ甲苯，分离出有机层。有机层用１００ｍＬ５％氢氧化钠水溶液洗涤５次，再用１００ｍＬ水洗涤４次，浓缩得到３６ｇ油状物质。在真空条件下蒸馏，得２８ｇ１?（２，２，２?三氟乙氧基）萘，产率７６％。二氯甲烷均为广东汕头市西陇化工股份有限公司产品；氢化钠为国药集团化学试剂有限公司产品，四氢呋喃为成都市科龙化工试剂厂产品；ＲＰＭＩ１６４０高糖培养液为美国赛默飞公司生产；胎牛血清为杭州四季青公司产品；四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）、二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）为美国默克公司产品；蛋白质定量试剂盒（ＢＣＡ）试剂盒，ＬＤＨ乳酸脱氢酶试剂盒为上海碧云天生物科技有限公司生产产品；凋亡抑制剂Ｚ?ＶＡＤ（ＯＨ）?ＦＭＫ（Ｚ?ＶＡＤ?ＦＭＫ）（ＨＹ?１６６５８），丝裂霉素购于中国ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ公司；ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ２、ＥＧＦＲ、Ｎ?ｃｏｄｈｅｒｉｎ、Ｅ?ｃｏｄｈｅｒｉｎ、Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、Ｂａｘ、Ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ?３、ｃａｓｐａｓｅ?９为艾博抗（上海）贸易有限公司生产；４％细胞组织固定液（多聚甲醛）为北京索莱宝生物科技有限公司生产；碘化丙啶／核糖核酸Ｆｉｇ２　ＳｙｎｔｈｅｔｉｃｒｏｕｔｅｏｆｍａｔｒｉｎｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅＺＳ１０Copyright?博看网. All Rights Reserved.

·１１８·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３Ｊａｎ；３９（１）－１、２、４、６、８μｍｏｌ·ＬＺＳ１０的无血清培养基，置为１

　　在０℃、氮气保护条件下，７?４７ｇ（６５ｍｍｏｌ）１，１?二氯甲醚溶于３０ｍＬ二氯甲烷中，缓慢滴加１６?９４ｇ（６５ｍｍｏｌ）无水四氯化锡，保持０℃反应１ｈ，溶液变为淡黄色，将７?４５８ｇ（３２?５ｍｍｏｌ）１?（２，２，２?三氟０ｍＬ二氯甲烷并注入反应液中，乙氧基）萘溶于２然后反应液从冰浴条件下缓慢加热至室温，过夜搅拌，反应结束后加入１００ｍＬ冰水，分离出有机相，水洗多次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得８?８６ｇ粗品，经快速硅胶柱层析纯化得８?８３ｇ白色固体，即化合?（２，２，２?三氟乙氧基）?１?萘甲醛，产率９３％。物４于１００ｍＬ圆底烧瓶中分别加入２?８ｇ（１１６ｍｍｏｌ）氢化钠、５０ｍＬ无水四氢呋喃，搅拌均匀，加入１?２４ｇ（５ｍｍｏｌ）苦参碱，回流，加入２?５ｇ（１０）４?（２，２，２?三氟乙氧基）?１?萘甲醛，ＴＬＣ检测ｍｍｏｌ反应至终点。冷却，用３Ｎ的盐酸调节反应液至中性。２０ｍＬ×３二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤、浓缩，得黄色油状物。经硅胶柱层析，Ｖ乙酸乙酯∶Ｖ石油醚＝５∶４纯化得白色粉末固体，即１４?［１?（４?三氟乙氧基）萘甲烯基］苦参碱，乙酸乙酯－甲醇重结晶得１?８１ｇ白色粉末，产率４４％。２．２　细胞培养　人体肝癌细胞系ＢＥＬ?７４０２用ＲＰ?ＭＩ１６４０培养基外加１０％胎牛血清（Ｇｉｂｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）和１％青霉素／链霉素双抗（Ｇｉｂｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）培养，细胞培养在３７℃、５％ＣＯ２培养箱中。２．３　ＭＴＴ法检测ＺＳ１０对细胞增殖－毒性影响　取对数生长期ＢＥＬ?７４０２细胞，胰酶消化，种于９６孔７－１板（１×１０·Ｌ），每孔加入１００μＬ培养基，３７℃于培养箱中培养４８ｈ后，将细胞分为背景空白对照组、样品对照组、样品最大酶活性对照组、给药组，每组设５个复孔，收集细胞培养液，按照试剂盒说明书５０ｎｍ测定ＬＤＨ吸光度值，进行进行样本处理，在４计算。２．５　ＤＡＰＩ染色　取对数生长期ＢＥＬ?７４０２细胞，８－１胰酶消化，种于６孔板（１×１０Ｌ），３７℃孵育２４－１ｈ，贴壁，分别加入含浓度为１、２、４、６、８μｍｏｌ·ＬＺＳ１０的培养基，置于培养箱中培养４８ｈ后，吸除培养基，ＰＢＳ清洗１遍，使用多聚甲醛固定２０ｍｉｎ，用ＰＢＳ清洗２遍，加入ＤＡＰＩ溶液，染色１０ｍｉｎ，ＰＢＳ清洗２遍，采用高内涵细胞成像分析系统进行拍照分析。２．６　划痕实验　取对数生长期ＢＥＬ?７４０２细胞，胰８－酶消化，种于６孔板上（５×１０Ｌ１）。３７℃孵育２４ｈ，贴壁。吸弃培养基，用不含胎牛血清的培养基饥－１饿细胞６ｈ，用０?５ｍｇ·Ｌ丝裂霉素处理细胞３ｈ，用１００μＬ枪头均匀于６孔板背面划痕，宽度一致，ＰＢＳ清洗３次，用不含胎牛血清的培养基稀释ＺＳ１０。稀释后的ＺＳ１０浓度为：０、１、２、４、６、８μｍｏｌ·－１Ｌ。给药后，采用荧光倒置显微镜在０ｈ，２４ｈ、４８ｈ拍照。２．７　克隆形成实验　取对数生长期ＢＥＬ?７４０２细胞，胰酶消化，种于６孔板上（５００ｍＬ），２４ｈ后弃去－１原培养液，分别加入浓度为１、２、４、６、８μｍｏｌ·Ｌ的ＺＳ１０培养基，置于培养箱中培养６ｄ后，终止培养，弃去培养基，磷酸缓冲液（ＰＢＳ）清洗３次，４％多聚甲醛固定２０ｍｉｎ后，结晶紫染色，ＰＢＳ冲洗，室温风干，采用菌落计数分析系统拍照并计数。２．８　流式细胞术检测细胞周期　取对数生长期８ＢＥＬ?７４０２细胞，胰酶消化，种于６孔板上（５×１０－１Ｌ）。３７℃孵育２４ｈ，贴壁。胰酶消化成细胞悬－１液，１０００ｒ·ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，尽可能吸尽上清液。－１ＰＢＳ吹打洗涤细胞，１０００ｒ·ｍｉｎ离心５ｍｉｎ弃上孵育２４ｈ，贴壁。设置给ＺＳ１０实验组（有细胞＋不同浓度的ＺＳ１０）、空白组（不含细胞，用于调零酶标仪）、阴性对照组（有细胞，无ＺＳ１０的培养基）、苦参碱对照组（有细胞＋不同浓度苦参碱）、阳性药对照组（有细胞＋不同浓度伊替立康），抑制剂对照组（有细胞＋ＺＳ１０＋Ｚ?ＶＡＤ?ＦＭＫ）。设置药物组浓度－１均分别为：０、０?５、１、２、４、６、８、１６、３２、６４μｍｏｌ·Ｌ，每个浓度设置３个复孔。分别培养２４ｈ、４８ｈ和７２－１ｈ。配制５ｇ·Ｌ的ＭＴＴ溶液，每孔加１０μＬＭＴＴ清液，重复２次后，７０％乙醇固定，４℃放置１２ｈ，－１１０００ｒ·ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ后弃上清液，ＰＢＳ清洗并孵育４ｈ。弃上清液，每孔加２００μＬ二甲基亚砜，振荡１０ｍｉｎ，酶标仪检测ＯＤ值，重复实验３次。抑制率／％＝［１－（实验组ＯＤ值－空白组ＯＤ值）／（阴性对照组ＯＤ值－空白组ＯＤ值）］×１００％取对数生长期ＬＯ２细胞，同上操作。２．４　微板法检测ＢＥＬ?７４０２细胞ＬＤＨ释放率　取对数生长期ＢＥＬ?７４０２细胞，胰酶消化，种于９６孔板８－（１×１０Ｌ１），孵育２４ｈ后，贴壁，分别加入含浓度离心２次，弃上清液后加入５μＬ的碘化丙啶（ＰＩ）染液混匀，避光室温孵育３０ｍｉｎ，采用流式细胞仪进行细胞周期分析。２．９　流式细胞术检测细胞凋亡　取对数生长期８ＢＥＬ?７４０２细胞，胰酶消化，种于６孔板上（５×１０－１Ｌ）。３７℃孵育２４ｈ，贴壁。经１、２、４、６、８μｍｏｌ·－１－１ＬＺＳ１０干预４８ｈ后，胰酶消化，１０００ｒ·ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，收集细胞，弃上清液，加入１９５μＬ染色缓Copyright?博看网. All Rights Reserved.

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３Ｊａｎ；３９（１）·１１９·

冲液（ｂｉｎｄｉｎｇｂｕｆｆｅｒ）重悬细胞，５μＬ碘化丙啶（ＰＩ），混匀，孵育１５ｍｉｎ，采用流式细胞仪进行细胞凋亡分析。２．１０　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＺＳ１０对ＢＥＬ?７４０２细胞ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ通路及相关蛋白表达水平的影响　取对数生长期ＢＥＬ?７４０２细胞，胰酶消化，种６孔板上８－（５×１０Ｌ１）。３７℃孵育２４ｈ，贴壁。胰酶消化，１－１０００ｒ·ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃上清液，加含１％蛋白酶２?１９（ｄｔｄ，Ｊ＝１４?３，７?１，１?１Ｈｚ，１Ｈ），２?１５～２?０３（ｍ，３Ｈ），１?８７～１?７８（ｍ，１Ｈ），１?７２～１?６１（ｍ，４Ｈ），１?５６～１?４４（ｍ，５Ｈ），１?４４～１?３２（ｍ，１Ｈ），３１?１８～１?０３（ｍ，２Ｈ）；１ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，Ｃｏｍｍｏｎ）δ１７２?９７，１５５?８１，１３３?９８，ＮＭＲＣｈｌｏｒｏｆｏｒｍ?ｄ１３３?５０，１３２?４８，１３０?０８，１２９?０９，１２８?５４，１２６?８０，１２６?２２，１２５?４０，１２３?５５，１０９?１５，５７?１１，５７?０４，５６?２７，４７?１７，４２?３９，３５?８４，２７?７１，２５?８４，２３?９０，２３?５８，２１?７８，２１?３７。３．２　ＺＳ１０对ＢＥＬ?７４０２细胞增殖能力的影响　不同浓度ＺＳ１０干预２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ后，ＭＴＴ法检测结果显示，与空白组比较，ＺＳ１０对ＢＥＬ?７４０２细胞的增殖具有明显的抑制作用（Ｐ＜０?０５）。随着ＺＳ１０浓ＥＬ?７４０２细胞抑制率也逐渐增度逐渐增加，其对Ｂ加，呈剂量依赖性。ＭＴＴ结果显示，ＺＳ１０作用于ＢＥＬ?７４０２细胞２４、４８、７２ｈ后，半数抑制浓度（ＩＣ）５０分别为（１７?０２±２?２５）、（６?６２±１?１１）、（５?７２±－１０?８）μｍｏｌ·Ｌ（Ｆｉｇ３Ａ），相比之下，苦参碱作用于抑制剂的裂解液吹打，冰上放置３０ｍｉｎ，４℃、１２０００－１·ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，取上清液，用蛋白定量法测定ｒ蛋白含量。采用湿式转印法将蛋白转印到聚偏二氟乙烯膜（９５ｍＡ湿转１５０ｍｉｎ），封闭１ｈ，采用一抗４℃孵育过夜，二抗孵育１ｈ，充分洗膜后，显色，凝胶ｍａｇｅＬａｂ软件对条带灰度成像系统中成像，采用Ｉ值进行分析，每组重复检测３次，取平均值。２．１１　数据分析　采用ＧｒａｐｈＰａｄｐｒｉｓｍ８?０统计软珋件进行统计学分析。实验数据以ｘ±ｓ的形式表示，采用单因素方差分析。３　结果３．１　ＺＳ１０化学合成　在强碱氢化钠作用下，苦参碱与４?（２，２，２?三氟乙氧基）?１?萘甲醛在无水四氢呋喃溶液中回流，经缩合、脱水反应制得相应的目标化合物。ｍ．ｐ．２０４?５?２０６?９℃；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ?ｄ）δ：８?２４（ｄｄ，Ｊ＝７?４，１?６Ｈｚ，１Ｈ），７?６３（ｄｄ，Ｊ＝７?３，１?７Ｈｚ，１Ｈ），７?５３（ｔｄ，Ｊ＝７?５，１?６Ｈｚ，１Ｈ），７?４８（ｔｄ，Ｊ＝７?４，１?６Ｈｚ，１Ｈ），７?３７１１（ｄ，Ｊ＝１?３Ｈｚ，Ｈ），７?３３（ｄ，Ｊ＝７?５Ｈｚ，Ｈ），７?００ＢＥＬ?７４０２细胞２４、４８、７２ｈ后，半数抑制浓度均远大－１于１００μｍｏｌ·Ｌ，见Ｆｉｇ３Ｃ。ＺＳ１０药物浓度小于８－１ｍｏｌ·Ｌ时，与苦参碱相比，ＺＳ１０对人正常肝细胞μ无明显毒性，见Ｆｉｇ３Ｂ。Ｚ?ＶＡＤ?ＦＭＫ是一种泛ｃａｓｐａｓｅ抑制剂，能够抑制ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白酶活性，同时阻断线粒体途径和死亡受体途径的凋亡。将抑制剂与ＺＳ１０联合使用作用于ＢＥＬ?７４０２细胞，癌细胞活力明显升高，见Ｆｉｇ３Ｄ。乳酸脱氢酶主要位于细胞质中，其存在于细胞外培养液中可用于检测细胞膜完整性的破坏。结果表明，不同浓度的ＺＳ１０作用于ＢＥＬ?７４０２细胞４８ｈ后，ＬＤＨ释放呈剂量依赖性，见Ｆｉｇ３Ｅ。（ｄ，Ｊ＝７?５Ｈｚ，１Ｈ），５?２０～５?０４（ｍ，２Ｈ），３?９８（ｄｄ，Ｊ＝１２?４，６?６Ｈｚ，１Ｈ），３?０７～２?９０（ｍ，４Ｈ），Ｆｉｇ３　Ａ：ＥｆｆｅｃｔｏｆＺＳ１０ｏｎｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓ；Ｂ：ＴｏｘｉｃｉｔｙｏｆＺＳ１０ｏｎｈｕｍａｎｎｏｒｍａｌ；Ｃ：ＥｆｆｅｃｔｏｆｍａｔｒｉｎｅｏｎｖｉａｂｉｌｉｔｙｌｉｖｅｒＬＯ２ｃｅｌｌｓｏｆＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓ；Ｄ：ＥｆｆｅｃｔｏｆｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆＺＳ１０ａｎｄＺ?ＶＡＤ?ＦＭＫｏｎｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓ；Ｅ：Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙ?珋ｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ）ａｓｓａｙ（４８ｈ）（ｘ±ｓ，ｎ＝３）．???Ｐ＜０?０５，Ｐ＜０?０１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Copyright?博看网. All Rights Reserved.

·１２０·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３Ｊａｎ；３９（１）

　　由此可得，对苦参碱１４位的改造能够明显提升抗肿瘤活性，ＺＳ１０对ＢＥＬ?７４０２细胞的增殖具有明显的抑制作用，能够诱导细胞凋亡。根据上述结果，由于ＺＳ１０在４８ｈ和７２ｈ的－１ＩＣ相差不大，药物浓度超过８μｍｏｌ·Ｌ时，对人５０ＢＥＬ?７４０２细胞的集落形成数量逐渐减少，呈剂量依赖性。与空白组相比，各实验组ＢＥＬ?７４０２细胞的集落形成数量均明显下降，见Ｆｉｇ６。３．６　细胞周期实验　经ＺＳ１０处理的ＢＥＬ?７４０２细Ｇ胞，与空白组相比，细胞周期Ｓ期比例明显增加，２期明显下降。ＺＳ１０处理２４ｈ后，随着ＺＳ１０的浓度逐渐增加，细胞周期发生明显变化，ＧＧ０／１期的细胞比例基本保持不变，Ｓ期的细胞比例从（３７?２７±１?５４）％增加至（５０?４９±０?７６）％，ＧＭ期细胞比２／２５?６６±０?６７）％减少至（１２?１±０?５５）％。例从（采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测参与Ｓ期阻滞的调控因子，ＺＳ１０能明显抑制周期相关蛋白ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＣＤＫ２的表达，且呈现出浓度依赖性，见Ｆｉｇ７。３．７　细胞凋亡实验　分别取０、１、２、４、６、８μｍｏｌ·－１ＬＺＳ１０给药４８ｈ，ＢＥＬ?７４０２细胞的凋亡率由正常肝细胞具有毒性，综合考虑，为确保ＺＳ１０对肝癌细胞增殖有抑制作用且对正常肝细胞无毒，ＺＳ１０给药时间选择４８ｈ，药物浓度选择０、１、２、４、６、８－１ｍｏｌ·Ｌ进行后续实验。μ３．３　ＺＳ１０对ＢＥＬ?７４０２细胞的形态学变化的影响　ＤＡＰＩ染色实验结果表明，ＺＳ１０干预ＢＥＬ?７４０２细胞２４ｈ后，随着ＺＳ１０浓度的增加，显示与凋亡相关的明显形态学改变，细胞核大小不一，核固缩，染色质凝聚成团，进一步导致死亡，见Ｆｉｇ４。３．４　ＺＳ１０对肝癌细胞ＢＥＬ?７４０２迁移能力的影响　细胞划痕实验结果表明，ＺＳ１０能明显抑制ＢＥＬ?７４０２细胞的迁移，呈现出浓度依赖性。与空白组相比，在２４ｈ和４８ｈ，各实验组ＢＥＬ?７４０２细胞的迁移能力均明显下降。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验结果表明，ＺＳ１０能明显下调Ｎ?ｃａｄｈｅｒｉｎ、Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和ＥＧＦＲ蛋白的表达，并同时明显上调Ｅ?ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白的表达，且呈浓度依赖性，见Ｆｉｇ５。３．５　ＺＳ１０对ＢＥＬ?７４０２细胞克隆形成的影响　克隆形成实验结果表明，随着ＺＳ１０给药浓度的增加，（３?４５１±０?３１６）％明显增加至（５０?１６±２?１）％，处于早期凋亡的细胞比率明显增加为（１７?１±１?４）％。根据实验结果显示，ＺＳ１０能够在ＢＥＬ?７４０２细胞内诱发细胞凋亡，并且随着ＺＳ１０作用浓度的增加，细胞凋亡的比例也明显增加。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验结果显示，与对照组相比，ＺＳ１０下调了ＢＥＬ?７４０２细胞中ＰＩ３Ｋ、ＡＫＴ、Ｐ?ＡＫＴ，以及抗凋亡Ｂｃｌ?２蛋白，上调了ＢＥＬ?７４０２细胞中促ａｘ、ｃａｓｐａｓｅ?３、ｃａｓｐａｓｅ?９蛋白的表达（Ｐ凋亡蛋白Ｂ值均＜０?０５），见Ｆｉｇ８。Ｆｉｇ４　ＥｆｆｅｃｔｏｆＺＳ１０ｏｎｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓ（×４０）Copyright?博看网. All Rights Reserved.

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３Ｊａｎ；３９（１）·１２１·

珋Ｆｉｇ５　ＥｆｆｅｃｔｏｆＺＳ１０ｏｎｍｉｇｒａｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｏｆＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓ（ｘ±ｓ，ｎ＝３）Ａ：ＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓｃｒａｔｃｈｒｅｓｕｌｔｓｃｈａｒｔ；Ｂ：Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓｃｈａｒｔｏｆｓｃｒａｔｃｈｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｒｅｓｕｌｔｓ；Ｃ：ＴｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｉｎＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ；Ｄ：Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．??Ｐ＜０?０１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．珋Ｆｉｇ６　ＣｏｌｏｎｙｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄｂｙＺＳ１０（ｘ±ｓ，ｎ＝３）??Ｐ＜０?０１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．４　讨论　　本实验室选用２，２，２?三氟乙醇和甲苯磺酰氯为起始原料，参考文献中的方法，成功合成了４?（２，２，２?三氟乙氧基）?１?萘甲醛，收率较高。进一步与苦参碱反应，得到苦参碱衍生物ＺＳ１０。最后一步反应需要在保证无水的条件下才有利于反应发生。另外，回流温度有利于提高收率。ＺＳ１０中含有三氟乙氧基，使化合物脂溶性大大增强。同时，经ＭＴＴ实验验证，ＺＳ１０明显抑制ＢＥＬ?７４０２细胞增殖，且对正常肝细胞无明显毒性。Copyright?博看网. All Rights Reserved.

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３Ｊａｎ；３９（１）·１２３·

　　肝癌死亡率高的主要原因是肝癌细胞的转移，细胞迁移能力可反映癌细胞在体内的转移能力。划痕实验是在体外考察细胞迁移运动能力最经典的实验之一，采用划痕实验考察了ＺＳ１０对ＢＥＬ?７４０２细Ｆｉｇ５Ａ），ＺＳ１０明显抑制ＢＥＬ?胞迁移能力的影响（７４０２细胞的迁移。采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验考察ＺＳ１０对ＢＥＬ?７４０２细胞上皮间质转化（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｍｅｓ?ｅｎ?ｃｈｙｍａｌｔｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，ＥＭＴ）过程的影响，研究结果表?ｃａｄｈｅｒｉｎ低明，在肝癌患者中，上皮表型标志蛋白Ｅ表达，而间质表型标志蛋白Ｎ?ｃａｄｈｅｒｉｎ高表达，这与肝癌的预后效果不佳密切相关（Ｆｉｇ５Ｃ），ＺＳ１０抑制ＰＩ３Ｋ、ＡＫＴ、ｐ?ＡＫＴ、Ｎ?ｃａｄｈｅｒｉｎ以及Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的表达，且呈剂量依赖性，同时抑制ＥＧＦＲ的表达，并促?ｃａｄｈｅｒｉｎ的表达，从而抑制细胞迁移。进Ｅ细胞周期与细胞增殖密切相关，Ｓ期是细胞ＤＮＡ合成的关键时期，Ｓ期阻滞可使细胞增殖周期延长，增殖速度减慢。实验结果显示，与空白组相ＺＳ１０使ＢＥＬ?７４０２细胞周期Ｓ期明显增加，Ｇ比，２／Ｍ期细胞相应减少，诱导Ｓ期阻滞。因此，ＺＳ１０抑制ＢＥＬ?７４０２细胞增殖的机制之一可能是延长细胞周期。在癌细胞增殖中，ＰＩ３Ｋ激活ＡＫＴ信号通路，调控Ｇ，ＧｙｃｌｉｎＤ１的表达，促进１２细胞周期进展和Ｃ癌细胞生长［１２］升高，说明ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ通路在ＺＳ１０诱导细胞凋亡中发挥重要作用。与未使用抑制剂的ＺＳ１０组对比，将Ｚ?ＶＡＤ?ＦＭＫ与ＺＳ１０共同作用于ＢＥＬ?７４０２细胞，细胞依旧ＺＳ１０浓度低于８ｍｏｌ／Ｌ存在增殖抑制现象，然而，μ时，对人正常肝细胞未见明显毒性，推测原因可能是Ｚ?ＶＡＤ?ＦＭＫ抑制了与ｃａｓｐａｓｅ相关通路的ＢＥＬ?７４０２细胞的凋亡，但是，ＺＳ１０可能同时作用于多条ＥＬ?７４０２细胞凋亡。信号通路，诱导Ｂ　　在本研究中，合成了一种苦参碱衍生物ＺＳ１０，该化合物在体外明显抑制肝癌细胞的增殖（Ｆｉｇ３～），基于ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ通路诱导ＢＥＬ?７４０２细胞凋亡并５阻滞Ｓ期，为该化合物进一步开发成治疗肝癌的药物提供了实验依据，但ＺＳ１０可能对多条信号通路具有明显作用，抑制ＢＥＬ?７４０２细胞增殖，诱导细胞凋亡，这需要进一步的研究证实。参考文献：［１］　ＴｅｓｔｉｎｏＧ，ＬｅｏｎｅＳ，ＰａｔｕｓｓｉＶ，ｅｔａｌ．Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ：Ｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｐｒｏｐｏｓａｌｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．ＭｉｎｅｒｖａＭｅｄ，２０１６，１０７（６）：４１３－２６．［２］　ＬｕＺ，ＺｈａｎｇＷ，ＧａｏＳ，ｅｔａｌ．ＭｉＲ?５０６ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒＳＰＨＫ１）ｍＲ?ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈｔａｒｇｅｔｉｎｇｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ１（ＮＡ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２０１５，４６８（１－２）：８－１３．［３］　ＷａｎｇＣ，ＢａｉＸ，ＷａｎｇＣ，ｅｔａｌ．ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ：Ａｔｒｅａｓｕｒｅｄｎａｔｕｒａｌｒｅｓｏｕｒｃｅｏｆａｎｔｉｃａｎｃｅｒｄｒｕｇｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄｄｅｖｅｌｏｐ?［Ｊ］．ＡＭＪＣｈｉｎＭｅｄ，２０１４，４２（３）：５４３－５９．ｍｅｎｔ［４］　ＨｏｎｇＳ，ＪｕｎｇＫＨ，ＬｅｅＨｅｔ，ｅｔａｌ．ＳＢ３６５ｉｎｈｉｂｉｔｓａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｉｎｄｕｃｅｓａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｔｈｒｏｕｇｈｍｏｄｕｌａ?［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＳｃｉ，ｔｉｏｎｏｆＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ２０１２，１０３（１１）：１９２９－３７．［５］　ＺｈｕＷ，ＳｈａｏＹ，ＹａｎｇＭｅｔ，ｅｔａｌ．Ａｓｐａｒａｇｉｎｙｌｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅｐｒｏ?ｍｏｔｅｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｖｉａＰＩ３Ｋ／ＡＫＴｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｇｅｎｅ，２０１６，５９４（２）：１７６－８２．［６］　官成浓，蔡良真，岳利群，等．岩舒注射液配合化疗治疗晚期原发性肝癌的临床研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００６，３１（６）：５１０－２．［６］　ＧｕａｎＣＮ，ＣａｉＬＺ，ＹｕｅＬＱ，ｅｔａｌ．Ｃｌｉｎｉｃｅｌｓｔｕｄｙｏｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆａｄｖａｎｃｅｄｐｒｉｍａｒｙｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｂｙｙａｎｓｈｕｉｎｊｅｃｔｉｏｎｃｏｍｂｉｎｉｎｇ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＣｈｉｎＭａｔｅＭｅｄ，２００６，３１（６）：ｗｉｔｈｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ５１０－２．［７］　ＬｉｕＪ，ＬｉｕＹ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｅｒｂａｎｘｉａｏｓｏｌｕｔｉｏｎｏｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇａｎｇｉｏ?ｇｅｎｅｓｉｓｉｎｓｔａｓｉｓｔｏｘｉｎｓｔａｇｎａｔｉｏｎｏｆｎｏｎ?ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＪＴｒａｄｉｔＣｈｉｎＭｅｄ，２０１３，３３（３）：３０３－６．［８］　ＳｕｎＭ，ＣａｏＨ，ＳｕｎＬ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｋｕｓｈｅｎ：Ｌｉｔ?ｅｒａｔｕｒｅｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．ＥｖｉｄＢａｓｅｄＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔＡｌｔｅｒｎａｔＭｅｄ，２０１２，（２）：３７３２１９．［９］　陈　坚，梅　琪，徐迎春，等．复方苦参碱注射液对恶性肿瘤患。细胞周期蛋白依赖性激酶（ＣＤＫｓ）与相应的细胞周期蛋白复合物参与细胞周期进展。１３］ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＣＤＫ２作为细胞周期调节因子［，Ｃｙｃ?ｌｉｎＤ１在多种肿瘤细胞中都呈现过度表达，是多种人类原发性肿瘤的特征之一，具有重要的参考意义。ＺＳ１０能够抑制ＡＫＴ、ｐ?ＡＫＴ、ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＣＤＫ２表达，呈浓度依赖性下调，进而调节癌细胞周期，诱导ＢＥＬ?７４０２细胞Ｓ期阻滞。ＡＫＴ的磷酸化可以调控Ｂａｘ、Ｂｃｌ?２蛋白表达，１４］Ｂａｘ和Ｂｃｌ?２是细胞凋亡的主要调控蛋白之一［，据报道，Ｂｃｌ?２可自制细胞色素Ｃ释放到胞质中，并与其同源物一起维持线粒体膜的完整性［１５］，在细胞１６］内二者通常以二聚体形式发挥作用［，通过二者比值，可以判断细胞凋亡状态。比值升高导致线粒体外孔膜形成，细胞色素Ｃ释放进入胞质，和Ａｐａｆ?１形成凋亡体，激活ｃａｓｐａｓｅ?３和ｃａｓｐａｓｅ?９，导致细胞死亡［１７］。ｃａｓｐａｓｅ蛋白酶家族在细胞凋亡中起到重要作用。其中ｃａｓｐａｓｅ?３和ｃａｓｐａｓｅ?９的激活与细胞凋亡密切相关。Ｓ１０给药浓度的升高，实验结果表明，随着ＺＰＩ３Ｋ、ＡＫＴ、Ｐ?ＡＫＴ以及抗凋亡蛋白Ｂｃｌ?２表达均下调，促凋亡蛋白Ｂａｘ表达上调，同时，其下游的ｃａｓｐａｓｅ?３和ｃａｓｐａｓｅ?９表达也上调，Ｂａｘ／Ｂｃｌ?２比值Copyright?博看网. All Rights Reserved.

·１２４·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３Ｊａｎ；３９（１）［１３］ＰｅｎｇＦ，ＬｉＧ，ＸｉｅＹ，ｅｔａｌ．Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｐｙｒｕｓｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓｍａｘｉｍａｎｄｔｈｅｉｒａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄｉｎｄｕｃ?ｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎＢｅｌ?７４０２ｃｅｌｌ［Ｊ］．ＪＦｏｏｄＢｉｏｃｈｅｍ，２０２０，４４（６）：ｅ１３２２２．［１４］ＬｉＨ，ＬｖＢ，ＫｏｎｇＬ，ｅｔａｌ．Ｎｏｖａ１ｍｅｄｉａｔｅｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｒａｔｐｈｅｏ?ｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａｃｅｌｌｓｔｏｈｙｐｏｘｉａ?ｉｎｄｕｃｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｖｉａｔｈｅＢａｘ／Ｂｃｌ?［Ｊ］．ＩｎｔＪＭｏｌＭｅｄ，２０１７，４０（４）：１１２５－２／ｃａｓｐａｓｅ?３ｐａｔｈｗａｙ３．［１５］ＦｒｏｍｅｎｔｙＢ．ＡｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓｉｎｄｒｕｇ?ｉｎｄｕｃｅｄｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｈｅｍＴｏｘｉｃｏｌ，２０２０，１３５：１１０９１６．［１６］ＭａｌｌａＲ，ＧｏｐｉｎａｔｈＳ，ＡｌａｐａｔｉＫ，ｅｔａｌ．ＤｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｕＰＡＲａｎｄｃａｔｈｅｐｓｉｎＢｉｎｄｕｃｅｓａｐｏｐｔｏｓｉｓｖｉａｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＢｃｌ?２ａｎｄＢａｘａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅＰＩ３Ｋ／Ａｋｔｐａｔｈｗａｙｉｎｇｌｉｏｍａｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１０，５（１０）：ｅ１３７３１．［１７］ＭａｂｕｃｈｉＳ，ＫｕｒｏｄａＨ，ＴａｋａｈａｓｈｉＲ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲｐａｔｈｗａｙａｓａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｉｎｏｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｇｙ?ｎｅｃｏｌＯｎｃｏｌ，２０１５，１３７（１）：１７３－９．者伽马刀放射治疗后Ｔ淋巴细胞亚群的影响［Ｊ］．中西医结合学报，２００６，４（１）：７８－９．［９］　ＣｈｅｎＪ，ＭｅｉＱ，ＸｕＹＣ，ｅｔａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍａｔｒｉｎｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｏｎｔｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒａｆｔｅｒｇａｍｍａｋｎｉｆｅｒａｄｉｏｓｕｒｇｅｒｙ［Ｊ］．ＪＣｈｉｎＩｎｔｅｇＭｅｄ，２００６，４（１）：７８－９．［１０］黄思夏，范文斌，刘　鹏，等．复方苦参注射液联合铂类化疗药物治疗中晚期胃癌的Ｍｅｔａ分析［Ｊ］．中国中药杂志，２０１１，３６（２２）：３１９８－２０２．［１０］ＨｕａｎｇＳＸ，ＦａｎＷＢ，ＬｉｕＰ，ｅｔａｌ．Ｍｅｔａａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｍａｔｒｉｎｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｃｉｓｐｌａｔｉｎｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｆｏｒａｄ?［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＣｈｉｎＭａｔｅＭｅｄ，２０１１，３６ｖａｎｃｅｄｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ（２２）：３１９８－２０２．［１１］ＹｅＧ，ＺｈｕＨ，ＬｉＺ，ｅｔａｌ．ＬＣ?ＭＳｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｆｆｉｃａｃｙｓｕｂ?ｓｔａｎｃｅｓｉｎｓｅｒｕｍｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｎｉｍａｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＳｏｐｈｏｒａｆｌａ?ｖｅｓｃｅｎｓｅｘｔｒａｃｔｓ［Ｊ］．ＢｉｏｍｅｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒ，２００７，２１（６）：６５５－６０．［１２］ＧａｏＮ，ＺｈａｎｇＺ，ＪｉａｎｇＢＨ，ｅｔａｌ．ＲｏｌｅｏｆＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲｓｉｇ?ｎａｌｉｎｇｉｎｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２００３，３１０（４）：１１２４－３２．

ＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｍａｔｒｉｎｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅＺＳ１０ａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＰＩ３Ｋ／ＡＫＴｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＢＥＬ?７４０２ＷＡＮＧＸｉａｎｇ，ＺＨＡＮＧＳｅｎ，ＨＡＮＫｅ?ｙａｎ，ＺＥＮＧＰａｎ?ｋｅ，ＬＩＸｕｅ?ｊｉａｏ，ＷＡＮＧＬｉ?ｓｈｅｎｇ（ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＧｕａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００４，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｉｍ　ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｏｆｍａｔｒｉｎｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅＺＳ１０ｉｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｄｕｃｉｎｇａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＺＳ１０ｗａｓｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｂｙｏｒｇａｎｉｃｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｔｈｅｉｎｈｉｂｉ?ｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆＺＳ１０ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＭＴＴｍｅｔｈｏｄａｔｔｈｅｔｉｍｅｏｆ２４ｈ，４８ｈａｎｄ７２ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄＩＣａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．５０ｗＤＡＰＩｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓｕｓｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｓｔａｔｅｏｆＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓ．Ｃｌｏｎｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｏｂ?ｓｅｒｖｅｔｈｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓ，ｆｌｏｗｃｙ?ｔｏｍｅｔｒｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅａｒｒｅｓｔａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＢＥＬ７４０２ｃｅｌｌｓ，ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＰＩ３Ｋ／ＡＫＴｐａｔｈｗａｙａｎｄｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＭＴＴｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ－１ｔｈａｔｔｈｅＩＣａｓ（６?６２±１?１１）μｍｏｌ·Ｌ；ＤＡＰＩ５０ｗｒｅｓｕｌｔｓｏｆｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＺＳ１０ｉｎｄｕｃｅｄＳｐｈａｓｅａｒｒｅｓｔａｎｄｃｙｃｌｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓ．ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＺＳ１０ａｔｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ０－１ｏｌ·ＬｃｏｕｌｄｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅＰＩ３Ｋ／ＡＫＴｐａｔｈ?～８μｍｗａｙａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎａｄｏｓｅ?ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎ?ｎｅｒ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＩ３Ｋ，ＡＫＴ，Ｐ?ＡＫＴａｎｄａｎｔｉ?ａｐｏｐｔｏｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎＢｃｌ?２ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｏ?ａｐｏｐ?ｔｏｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎＢａｘｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣｙｃｌｉｎＤ１ａｎｄＣＤＫ２ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＧＦＲａｎｄＮ?ｃａｄｈｅｒｉｎ，Ｖｉｍｅｎｔｉｎｓｉｇ?ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｅｘ?ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥ?ｃａｄｈｅｒｉｎｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ｍａ?ｔｒｉｎｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅＺＳ１０ｃａｎｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｐｒｏｌｉｆ?ｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＢＥＬ?７４０２．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍａｔｒｉｎｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅＺＳ１０；ＢＥＬ?７４０２；ｍｉｇｒａｔｉｏｎ；ｃｙｃｌｅ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴｓｉｇｎａ?ｃｅｌｌｓｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｔａｉｎｉｎｇｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｅｌｌｓｔａｔｅｃｈａｎｇｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｄｒｕｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＺＳ１０ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎ?ｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＢＥＬ?７４０２ｃｅｌｌｓ．ＴｈｅCopyright?博看网. All Rights Reserved.