重庆地区雏鹅暴发鸭病毒性肝炎

2024年3月13日发(作者：进口奥迪a4allroad)

１２　中国兽医杂志２０１２年（第４８卷）第４期　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　

重庆地区雏鹅暴发鸭病毒性肝炎　

唐　好　，甘艳君　，陈思怀　，何洪章　，郎静宇　，李继祥　

（１．西南大学荣昌校区动物医学系，重庆荣昌４０２４６０；２．重庆永健生物技术有限公司，重庆荣昌４０２４６０）　

摘要：鸭病毒性肝炎是一种传播迅速并对雏鸭具有高度致死性病毒病，以肝炎为其主要特征。本文报道重庆地区雏鹅暴　

发鸭病毒性肝炎病例。疾病发生于３～１４日龄雏鹅，发病率２Ｏ　～３Ｏ　，死亡率２Ｏ　～２５　，临死前出现角弓反张及病死鹅　

肝脏出血。利用ＲＴ－ＰＣＲ能从肝组织中检测到鸭肝炎病毒Ａ型（ＤＨＶ－Ａ）和Ｃ型（ＤＨＶ－Ｃ）的ＶＰ１基因。利用鸭胚从肝组织　

中分离出Ａ型病毒ＣＱ１株和Ｃ型病毒ＣＱ２株，二者人工接种能引起６～７日龄雏鹅出现典型临床症状与病变。这是首次报　

道Ａ型和Ｃ型鸭肝炎病毒混合感染导致雏鹅发病死亡。　

关键词：鸭病毒性肝炎；鸭肝炎病毒；鹅；ＶＰ１基因　

中图分类号：￥８５２．６５　９．６　文献标识码：Ａ　文章编号：０５２９—６００５（２０１２）０４—００１２—０３　

收稿日期：２０１１一Ｏ６—３Ｏ　

基金项目：西南大学博士基金（０９ＢＳｒ０２）　

作者简介：唐妤（１９８１一），女，讲师，硕士，主要从事动物疫病病理　

学研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｔａｎｇｙｕ１２２９＠１６３．ｃｏｒｎ　

通讯作者：李继祥，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉｘｉａｎｇｌｕｃｋ￣ｒ＠１２６．ｃｏｒｎ　

Ｆ和ＨＮ基因全长同源性分析发现，２个鸭　

Ｃｈｉｎａ／５８／２Ｏ０８）明显不同。Ｆ基因和ＨＮ基因全长　

ＮＤＶ分离株与与基因ⅦＮＤＶ分离株同源性较高，　

分别为９４．１　～９９．７　和９４．４　～９７．１　，与同期　

分离的鸡源ＮＤＶ强毒株Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃｈｉｎａ／ＳＤ４／２ｏｏ８　

（ＨＭ７４８９４７）同源性最高，分别为９９．３　～９９．５　９，６　

和９９．５　～９９．７　，而与健康鸭群ＮＤＶ分离株　

序列分析结果表明，２个鸭ＮＤＶ分离株与同期鸡源　

ＮＤＶ分离株Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃｈｉｎａ／ＳＤ４／２００８核苷酸同　

源性分别为９９．３　～９９．５　和９９．５％～９９．７　，与　

健康鸭群ＮＤＶ分离株Ｄｕｃｋ／Ｃｈｉｎａ／５８／２Ｏ０８同源　

性为６５．１　～６５．３　和７２．３　～７２．６　，表明２个　

Ｄｕｃｋ／Ｃｈｉｎａ／５８／２００８（Ｃｌａｓｓ　１分支）同源性为６５．１　～　

６５．３　和７２．３　～７２．６　。两个鸭分离株Ｄｕｃｋ／　

Ｃｈｉｎａ／ＳＤ６／２００８和Ｄｕｃｋ／Ｃｈｉｎａ／ＳＤ７／２００９　Ｆ基因　

鸭ＮＤＶ分离株可能来源于鸡群，而与从健康鸭群　

分离的ＮＤＶ弱毒株无关。　

参考文献：　

［１］殷震，刘景华．动物病毒学［Ｍ］．２版．北京：科学出版社，１９９７：　

７４３—７４８．　

和ＨＮ基因全长同源性分别为９９．８　和９９．５　。　

３分析与讨论　

随着临床上鸭群感染ＮＤＶ发病的不断出现，　

山东省部分蛋鸭或种鸭群已进行ＮＤ疫苗的免疫，　

本研究的发病鸭群也已进行ＮＤ免疫，发生产蛋下　

降前ＮＤＨＩ抗体滴度分别为６．３　ｌｏｇ２～７．４　ｌｏｇ２和　

９．４　ｌｏｇ　～１２　ｌｏｇ　，鸭群主要表现采食量下降，死淘　

率正常，产蛋下降１５　～３Ｏ　，畸形蛋增加。从发　

生产蛋下降到恢复正常一般需要２～４周，新城疫　

ＨＩ抗体滴度并没有明显的升高（另文报道），而鸡群　

感染ＮＤＶ发生产蛋下降前后ＨＩ抗体滴度一般会　

升高２　ｌｏｇ。左右，具体原因尚有待进一步研究。　

建立在ＮＤＶ　Ｆ基因高变区（３７４　ｂｐ）的系统进　

化和基因分型方法已被证明是ＮＤＶ分类的最有效　

方法，广泛用于ＮＤＶ的分子流行病学研究。基因　

分型结果表明，２个鸭ＮＤＶ分离株属于基因Ⅶ，与　

［２］　Ａｌｉｚ　Ｃｚｅｇｌ６ｄｉ，Ｄｏｒｉｎａ　ｕｊｖｄｒｉ，Ｅｓｚｔｅｒ　Ｓｏｍｏｇｙｉ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｉｒｄ　

ｇｅｎｏｍｅ　ｓｉｚｅ　ｃａｔｅｇｏｒｙ　ｏｆ　ａｖｉａｎ　ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ　ｓｅｒｏｔｙｐｅ　１（Ｎｅｗ—　

ｃａｓｔｌｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖｉｒｕｓ）ａｎｄ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ　ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｕｓ　

Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００６，１２０：３６—４８．　

［３］Ｌ　Ｍｉａ　Ｋｉｍ，Ｄａｎｉｅｌ　Ｊ　Ｋｉｎｇ，Ｐｈｉｌｌｉｐ　Ｅ　Ｃｕｒｒｙ，ｅｂａ１．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔ—　

ｉｃ　Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｍｏｎｇ　Ｌｏｗ－Ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｖｉｒｕｓｅｓ　

ｆｒｏｍ　Ｗａｔｅｒｆｏｗｌ　ａｎｄ　Ｓｈｏｒｅｂｉｒｄｓ　ａｎｄ　Ｃｏｍｐｒａｒｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｅｎｏｔｙｐｅ　

Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ　ｔｏ　Ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　Ｐｏｕｌｔｒｙ－Ｏｒｉｇｉｎ　Ｉｓｏｌａｔｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　

Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００７，１２：１２６４１—１２６５３．　

［４］Ｌ　Ｍｉａ　Ｋｉｍ，Ｄａｎｉｅｌ　Ｊ　Ｋｉｎｇ，Ｄａｖｉｄ　Ｌ　Ｓｕａｒｅｚ，ｅｔ　ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ—　

ｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｌａｓｓ　Ｉ　Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｖｉｒｕｓ　Ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｈｏｎｇ　

Ｋｏｎｇ　Ｌｉｖｅ　Ｂｉｒｄ　Ｍａｒｋｅｔｓ　ａｎｄ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｕｓｉｎｇ　Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ　Ｒｅ—　

ｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰＣＲ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，　

２００７，４：１３１０－Ｉ３１４．　

［５］刘秀梵．家养水禽Ａ型流感和新城疫病毒的感染和临床疾病　

［ｃ］．第１５届世界禽病大会（中国畜牧兽医学会２００７年学术　

年会）论文集，２００７：８７—９５．　

［６］胡北侠，黄艳艳，姜宁朋，等．蛋鸡输卵管积液中新城疫强毒的　

国内近年来分离的基因ⅦＮＤＶ遗传距离很近，特别　

是与本实验室同期分离的山东省鸡源ＮＤＶ强毒株　

（Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃｈｉｎａ／ＳＤ４／２００８）遗传距离最近，而与本　

分离鉴定与分子特征［Ｊ］．中国兽医杂志，２００９，４５（４）：９－１２．　

［７］Ｈｕ　Ｂ，Ｈｕａｎｇ　Ｙ，Ｚｈａｎｇ　Ｘ，ｅｔ　ａ１．Ａｖｉａｎ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　ｖｉｒｕｓ　ａｎｄ　

Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖｉｒｕｓ（ＮＤＶ）ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ　ｉｎ　ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　

ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｆａｒｍ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉ０ｎ　ｏｆ　Ｃｌａｓｓ　Ｉ　

实验室从健康鸭群分离的Ｃｌａｓｓ　Ｉ　ＮＤＶ（Ｄｕｃｋ／　

ＮＤＶ　ｉｓｏｌａｔｅｓ［Ｊ￣．Ｖｅｔ　Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌ，２０１０，１４４（１－２）：８２—８６．　

Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａ１　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　中国兽医杂志２０１２年（第４８卷）第４期　１３　

ＤＶＨ　ｏｕｔｂｒｅａｋ　ｉｎ　ｇｅｅｓｅ　ａｔ　Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ　

ＴＡＮＧ　Ｙｕ　，ＧＡＮ　Ｙａｎ—ｊ　ｕｎ　，ＣＨＥＮ　Ｓｉ—ｈｕａｉ　，ＨＥ　Ｈｏｎｇ—ｚｈａｎｇ。，ＬＡＮＧ　Ｊｉｎｇ—ｙｕ　，ＬＩ　ｊｉ—ｘｉａｎｇ　

（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｒｏｎｇｃｈａｎｇ　Ｃａｍｐｕｓ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０２４６０，Ｃｈｉｎａ；　

２．Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｆｏｒｅｖｅｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０２４６０，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｄｕｃｋ　ｖｉｒｕｓ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ（ＤＶＨ）ｉｓ　ａ　ｆａｔａｌ　ａｎｄ　ｒａｐｉｄｌｙ　ｓｐｒｅａｄｉｎｇ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　ｙｏｕｎｇ　ｄｕｃｋｌｉｎｇｓ．Ｔｈｅ　

ｍａｊｏｒ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ　ｃｈａｎｇｅ　ｉｎ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｄｕｃｋｌｉｎｇｓ　ｉｓ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ．Ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ＤＶＨ　ｏｕｔｂｒｅａｋ　ｉｎ　ｇｅｅｓｅ　ｗｅｒｅ　ｒｅｐｏｒｔｅｄ．　

Ｔｈｒｅｅ　ｔｏ　ｆｏｕｒｔｅｅｎ　ｄａｙ　ｏｌｄ　ｇｅｅｓｅ　ｓｈｏｗｅｄ　ａｂｏｕｔ　２０　ｔｏ　３０　ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ　ａｎｄ　２０～２５　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ．Ｔｈｅ　ｄｙｉｎｇ　

ｇｅｅｓｅ　ｓｈｏｗｅｄ　ｏｐｉｓｔｈｏｔｏｎｕｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｇｒｏｓｓ　１ｅｓｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ。ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｓｗｏｌｌｅｎ。ａｎｄ　ｄｉｓ－　

ｐｌａｙｅｄ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｐｕｎｃｔｕａｔｅ　ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅｓ．Ｔｈｅ　ＶＰ１　ｇｅｎｅｓ　ｏｆ　ＤＨＶ—Ａ　ａｎｄ　ＤＨＶ—Ｃ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＲＴ—ＰＣＲ　

ｆｒｏｍ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｄｅａｄ　ｇｅｅｓｅ．ＤＨＶ—Ａ　ＣＱ１　ｓｔｒａｉｎ　ａｎｄ　ＤＨＶ—Ｃ　ＣＱ２　ｓｔｒａｉｎ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂｏｔｈ　

ｃａｕｓｅｄ　ｄｅａｔｈ　ｉｎ　６～７　ｄａｙ　ｇｅｅｓｅ．Ｔｈｉｓ　ｉＳ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｒｅｐｏｒｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｉｎｆｅｅｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＨＶ—Ａ　ｖｉｒｕｓ　ａｎｄ　

ＤＨＶ—Ｃ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎ　ｇｏｏｓｅ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｄｕｃｋ　ｖｉｒｕｓ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ；ｄｕｃｋ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ；ｇｏｏｓｅ；ＶＰ１　ｇｅｎｅ　

Ｃ０ｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＬＩ　ｊｉ—ｘｉａｎｇ　

鸭病毒性肝炎（ｄｕｃｋ　ｖｉｒｕｓ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ，ＤＶＨ）是　

１：４（Ｗ／Ｖ）加入灭菌生理盐水，高速匀浆制成肝组　

一

种传播迅速并对雏鸭具有高度致死性病毒病，以　

织乳剂，于一４Ｏ。Ｃ反复冻融３次；加入氯仿（终浓度　

肝炎为主要特征。本病可由３种不同类型的鸭肝炎　

为５　），室温下振荡１５　ｍｉｎ；５　０００　ｒ／ｍｉｎ（４℃）离心　

病毒（ｄｕｃｋ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ，ＤＨＶ）引起，即ＤＨＶ一１、　

１５　ｍｉｎ；上清液经微孔滤膜过滤除菌后备用。　

ＤＨＶ一２和ＤＨＶ一３Ｅｌｉ。依据３Ｄ基因（ＲＮＡ依赖性　

１．３病毒分离与纯化　将肝组织处理液用含双抗　

ＲＮＡ聚合酶，ＲｄＲｐ）的核苷酸序列，ＤＨＶ一２和　

（青霉素、链霉素各３００　ＩＵ（ｔ，ｇ）／ｍＬ）的生理盐水１０　

ＤＨＶ一３现已被归为星状病毒科（Ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）的成　

倍稀释，经尿囊腔接种１０日龄易感鸭胚（重庆永健　

员＿２］，但在台湾和韩国发现新型ＤＨＶ（ｎｅｗ　ｄｕｃｋ　

生物技术有限公司提供），每胚０．２　ｍＬ，３７℃培养７　

ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ，ＮＤＨＶ）。ＮＤＨＶ与ＤＨＶ一１有相　

ｄ，记录死胚情况。收集４８～９６　ｈ死亡鸭胚的尿囊　

似的基因组结构、ＶＰ１基因的核苷酸和氨基酸序列　液，经无菌和支原体检验合格后作为鸭胚毒，一４Ｏ℃　

相似性分别在７１　和７７　以下，无抗原相关性＿４］。　

保存备用。　

台湾和韩国ＮＤＨＶ在核苷酸和氨基酸水平上的相　

鸭胚毒用含双抗的生理盐水１００倍稀释，与鸭　

似性分别为７１　～７２　和７７　～７８　［４］。ＤＨＶ－１、　

肝炎病毒抗血清［抗鸭肝炎病毒Ｉ型血清（中国兽医　

台湾ＮＤＨＶ和韩国ＮＤＨＶ分别被命名为ＤＨＶ—　药品监察所范书才研究员惠赠），中和效价１：７７５，　

Ａ、ＤＨＶ—Ｂ和ＤＨＶ－Ｃ，其中ＤＨＶ—Ｂ仅台湾有病例　

批号：０８０６１３；抗鸭肝炎病毒韩国变异型ＬＳ株血　

报告，ＤＨＶ—Ｃ目前仅发生于中国大陆与韩国＿５］。　

清，自制，中和效价１：６１７］，按２５：１（Ｖ／Ｖ）混合，　

２０１０年１２月，重庆地区某些养鹅场的雏鹅疑似暴　

３７℃作用１　ｈ；接种１０日龄鸭胚，每胚０．２　ｍＬ；３７℃　

发鸭病毒性肝炎，经ＲＴ—ＰＣＲ检测鸭肝炎病毒ＶＰ１　

培养７　ｄ；收集４８～１６８　ｈ死亡鸭胚的尿囊液。经无　

基因、病毒分离鉴定及动物试验确诊为雏鹅暴发鸭　

菌和无支原体检验合格后的尿囊液按上述方法再用　

病毒性肝炎。　

抗血清中和１次，收集４８　ｈ～９６　ｈ死亡鸭胚的尿囊　

１材料与方法　

液即为分离病毒。　

１．４鸭胚中和试验将鸭肝炎病毒抗血清５倍递　

１．１　临床诊断２０１０年１２月，重庆地区某些养鹅　

进稀释后与２００ＥＬＤ５０／０．２　ｍＬ的病毒液等体积混　

场的３～１４日龄雏鹅疑似暴发鸭病毒性肝炎，发病　

合，３７℃作用１　ｈ；经尿囊腔接种１０日龄鸭胚，每胚　

率２Ｏ　～３０　，死亡率在２０　－－２５　。病鹅表现为　

０．２　ｍＬ；３７℃培养，每天照蛋２次，连续观察７　ｄ。　

蹲伏，嗜睡，侧卧，两腿痉挛性后踢，头向后背呈现角　

试验设空白对照和阴性血清对照。鸭胚在３７℃孵　

弓反张，在出现症状后１－－２　ｈ内死亡。死亡鹅的主　育观察１６８　ｈ。　

要病变在肝脏，表现为肿大、有点状或瘀斑状出血。　

１．５动物试验　６～７日龄健康四川白鹅（重庆永　

抗生素治疗无效，抗ＤＨＶ—Ａ和ＤＨＶ—Ｃ二价抗体　健生物技术有限公司提供）用于动物试验，每只鹅颈　

紧急预防注射能显著降低发病率和死亡率。　

部皮下接种１　０００ＥＬＤ５０／０．５　ｍＬ的病毒液，共接种　

１．２病料采集与处理　采集具有典型临床症状和　

１５只。试验设临床病死鹅肝组织处理液对照（０．５　

病理变化的５日龄病死鹅肝脏，剪碎后按组织重量　

ｍＬ／只）和生理盐水对照。各组动物隔离饲养，连续　

１４　中国兽医杂志２０１２年（第４８卷）第４期　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　

观察７　ｄ，记录发病和死亡情况、。剖检死亡鸭，观察　

病理变化，并采集肝组织用于ＤＨＶ　ＶＰ１基因检测。　

ＰＣＲ分别检测到ＤＨＶ—Ａ和ＤＨＶ—Ｃ型病毒的ＶＰ１　

基因，其与病料中检测到的相应ＶＰ１基因的核苷酸　

序列相似性１００　。ＣＱ１株和ＣＱ２株病毒ＶＰ１基　

因与１６株鸭肝炎病毒ＶＰ１基因的进化树分析结果　

见图１。在鸭胚中和试验中，ＣＱ１株能被抗鸭肝炎　

病毒工型（ＤＨＶ—Ａ型）血清中和，不被抗鸭肝炎病　

毒ＬＳ株（ＤＨＶ—Ｃ型）血清中和；而ＣＱ２株能被抗　

鸭肝炎病毒ＬＳ株血清中和，不被抗鸭肝炎病毒Ｉ　

１．６病毒ＲＮＡ的提取　按Ｔｒｉｚｏｌ说明书操作从　

肝组织处理上清液和鸭胚尿囊液中提取病毒ＲＮＡ。　

１．７　ＲＴ—ＰＣＲ及测序　扩增ＤＨＶ—Ａ和　ＤＨＶ—Ｃ　

ＶＰ１基因的引物按文献Ｉ－６－１报道的序列合成；扩增　

ＤＨＶ—Ｂ　ＶＰ１基因的引物以Ｏ４Ｇ株序列设计，上游　

引物为Ｂ—Ｆ：ＧＧＧＧＡＣＡＣＴＡＡＣＣＡＧＣＴＴＧＧＴＧ，　

下游引物为　Ｂ＿Ｒ：　ＧＡＴＧＧＡＧＣＴＣＡＡＡＣＧＣ—　

型血清中和。　

ＣＡＧＧＧ，由上海英骏生物技术有限公司合成。ＲＴ－　

２．３病例复制６～７日龄试验鹅接种临床病死鹅　

ＰＣＲ按试剂盒（ＴａＫａＲａ　ＲＮＡ　ＰＣＲ　Ｋｉｔ　Ｖｅｒ．３．０）　

鹅肝组织处理液、ＣＱ１株和ＣＱ２株病毒后分别在　

的使用说明进行，其ＰＣＲ条件为：９４℃预变性２　

１９　ｈ、２４　ｈ和２２　ｈ开始发病，表现出蹲伏，嗜睡及临　

ｍｉｎ，在９４℃３０　Ｓ、５４℃３０　Ｓ、７２℃１　ｍｉｎ进行３０个　

死前的角弓反张，死亡率分别为９３　、６７　和８０　。　

循环，最后在７２℃５　ｍｉｎ。ＰＣＲ产物经１　琼脂糖电　死亡鹅的病理变化主要在肝脏，表现为轻微肿大和　

泳，切胶，用胶回收试剂盒（ＴａＫａＲａ公司产品）回收　

出血。接种肝组织处理液的病死鹅肝脏中能检测到　

ＤＮＡ。纯化的ＰＣＲ产物与ｐＭＤ１８一Ｔ载体进行Ｔ—　ＤＨＶ—Ａ和ＤＨＶ—Ｃ型病毒的ＶＰ１基因，而接种　

Ａ克隆后测序（上海生工生物工程技术服务有限公　

ＣＱ１和ＣＱ２株病毒死亡鹅分别检测到ＤＨＶ—Ａ和　

司）。　

ＤＨＶ—Ｃ型病毒的ＶＰ１基因。　

１．８　序列分析　将测序结果用ＤＮＡＳｔａｒ的　

ＭｅｇＡｌｉｇｎ程序与ＧｅｎＢａｎｋ中登录的ＤＨＶ　ＶＰ１基　

３讨论　

因参考序列进行进化树分析。　

自１９４９年Ｌｅｖｉｎｅ和Ｆａｂｒｉｃａｎｔ报道美国长岛　

２　结果　

的鸭病毒性肝炎病例以来，鸭肝炎病毒在许多国家　

和地区相继分离出来。近年来，鸭病毒性肝炎的流　

２．１　病料中鸭肝炎病毒ＶＰ１检测及序列分析　利　行病学特征及鸭肝炎病毒的基因型等发生了一定的　

用ＲＴ—ＰＣＲ从病死鹅肝组织处理液中同时检测到　改变，在我国大陆及台湾有用弱毒疫苗免疫鸭群仍　

ＤＨｖ—Ａ和ＤＨＶ—Ｃ病毒的ＶＰ１基因，其分别与鸭　

发生典型鸭肝炎的报道［７鸪］，从台湾和韩国病死鸭中　

肝炎病毒Ｃ８０株（ＤＨＶ—Ａ型）和Ｃ—ＹＣＺ株（ＤＨＶ—Ｃ　

分别分离ＤＨＶ—Ｂ型和ＤＨＶ—Ｃ型病毒［３－４］。本文　

型）的参考序列相似性最高，分别为９８．３　和　

利用ＲＴ—ＰＣＲ从疑似暴发鸭病毒性肝炎的同一份　

９８．７　；ＤＨＶ—Ｂ病毒ＶＰ１基因检测为阴性。　

病死鹅肝组织中检测到ＤＨＶ—Ａ和ＤＨＶ—Ｃ型病毒　

２．２鸭肝炎病毒的分离鉴定　病死鹅肝组织处理　

的ＶＰ１基因，用鸭胚分离纯化到鸭肝炎病毒ＣＱ１　

液能在４８￣９６　ｈ内１００　（９／９）致死鸭胚，收集的　

株（ＤＨＶ—Ａ型）和ＣＱ２株（ＤＨＶ—Ｃ型），及ＣＱ１株　

尿囊液（鸭胚毒）经鸭肝炎病毒抗血清中和２次后获　

和ＣＱ２株病毒人工接种雏鹅均能复制出与临床病　

得ＣＱ１和ＣＱ２毒株。ＣＱ１和ＣＱ２株病毒经ＲＴ—　

例相似的病例　由此可确诊，重庆２０１０年１　２月某　

２５　２Ｏ　１　５　１０　５　０　

Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ　ｆｘ１　ｏｏ）　

图１　ＣＱ１株和ＣＱ２株病毒与１６株鸭肝炎病毒的进化树　

Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　中国兽医杂志２０１２年（第４８卷）第４期　１５　

雌激素受体　，１］；在雌性山羊　

肠系膜后神经节的表达　

吴卫妮，徐永平，王红梅，范　洁，王志豪，明　佳　

（西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌７１２１００）　

摘要：为探究雌激素是否通过交感神经调节雌性生殖系统的生理状态，试验选取雌山羊肠系膜后神经节，采用免疫组织　

化学ｓＰ法，检测雌激素受体　，ｐ在肠系膜后神经节中的表达及分布。结果显示，雌激素受体ａ，ｐ阳性产物在雌性山羊肠系　

膜后神经节广泛存在，强阳性产物存在于神经元胞膜和核中，阳性产物存在于整个神经元胞体以及核仁中。在神经节其他组　

成结构中也出现了阳性产物。表明在雌山羊肠系膜后神经元中存在雌激素受体，说明神经元对雌激素具有反应性；在神经节　

其他组成结构中出现阳性产物，说明雌激素可以经交感神经通路影响雌性生殖系统的生理机能，为研究雌性生殖系统的免疫　

神经调节提供了形态学证据。　

关键词：肠系膜后神经节；雌激素受体；免疫组织化学ＳＰ法：雌性山羊　

中图分类号：￥８５２．２　文献标识码：Ａ　文章编号：０５２９—６００５（２０１２）０４—００１５—０３　

Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＥＲ‘　ａｎｄ　ＥＲ—ｐ　ｉｎ　ｉｎｆｅｒｉｏｒ　ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃ　ｇａｎｇｌｉｏｎ　ｏｆ　ｆｅｍａｌｅ　ｇｏａｔ　

ＷＵ　Ｗｅｉ—ｎｉ，ＸＵ　Ｙｏｎｇ—ｐｉｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｈｏｎｇ—ｍｅｉ，ＦＡＮ　Ｊｉｅ，ＷＡＮＧ　Ｚｈｉ—ｈａｏ，ＭＩＮＧ　Ｊｉａ　

（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｓｅｉ—Ｔｅｃｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ　７１２１００，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｗｈｅｔｈｅｒ　ｔｈｅ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｏｆ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｒｅｇｕｌａｔｅ　ｔｈｅ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｔａｔｅ　ｏｆ　ｆｅｍａｌｅ　ｒｅ—　

ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ　ｎｅｒｖｏｕｓ　ｓｙｓｔｅｍ，ｗｅ　ｕｓｅ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｔｏ　

ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＥＲ）ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｆｅｒｉｏｒ　ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃ　ｇａｎｇｌｉｏｎ　ｏｆ　ｆｅ—　

ｍａｌｅ　ｇｏａｔ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ＥＲ—ｄ，Ｊ３　ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｅ　ｃｅｌｌｓ　ｅｘｉｓｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｆｅｒｉｏｒ　ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃ　ｇａｎｇｌｉｏｎ　

收稿日期：２０１卜０５—１７　究，Ｅ—ｍａｉｌ：ｗｕｗｅｉｎｉ一５２１１３１４＠１６３．ｃｏｍ　

作者简介：吴卫妮（１９８７一），女，硕士生，从事动物生殖内分泌的研　通讯作者：徐永平，Ｅ—ｍａｉｌ：ＸｕＹＰ７１７＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｃｎ　

些鹅场雏鹅暴发的疾病由ＤＨＶ－Ａ型和ＤＨＶ—Ｃ型　

ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　３　ａｓ　ａｓｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ［Ｊ］．Ａｖｉａｎ　Ｐａｔｈｏｌ，２００９，　

病毒混合感染所致。　

３８：２１—３Ｏ．　

Ｔｓｅｎｇ　Ｃ　Ｈ，Ｋｎｏｗｌｅｓ　Ｎ　Ｊ，Ｔｓａｉ　Ｈ　Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　

鸭肝炎自然病例仅发生于雏鸭，成年种鸭即使　

ｔｙｐｅ　１　ｄｕｃｋ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｉｔ　ｓｈｏｕｌｄ　ｂｅ　ａｓｓｉｇｎｅｄ　

在污染的圈舍中也无临床症状，产蛋正常口］。本文　

ｔｏ　ａ　ｎｅｗ　ｇｅｎｕｓ　ＥＪ］．Ｖｉｒｕｓ　Ｒｅｓ，２００７，１２３：１９０—２０３．　

确诊鸭肝炎病毒可自然感染雏鹅发病，其临床症状　

Ｋｉｍ　Ｍ　Ｃ，Ｋｗｏｎ　Ｙ　Ｋ，Ｊｏｈ　Ｓ　Ｊ，　口Ｚ．Ｒｅｃｅｎｔ　Ｋｏｒｅａｎ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　

与病理变化与雏鸭感染后的表现一致，也可导致高　

ｏｆ　ｄｕｃｋ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ　ｒｅｖｅａｌ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ　ｇｅｎｏ－ａｎｄ　

ｓｅｒｏｔｙｐｅ　ｗｈｅｎ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｔｏ　ｄｕｃｋ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　１　ｔｙｐｅ　

发病率和死亡率，给养鹅业带来重要启示。在雏鹅　

ｓｔｒａｉｎｓ口］．Ａｒｃｈ　Ｖｉｒｏ［，２００７，１５２：２０５９—２０７２．　

养殖过程，除加强小鹅瘟等疾病的防控外，鸭肝炎病　

Ｗａｎｇ　Ｌｉｙａｎ，Ｐａｎ　Ｍｅｎｇ，Ｆｕ　Ｙｕ，ｅｔ　ａ１．Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｕｃｋ　

毒感染的危害也不容忽视。在重庆地区有鸭和鹅混　

ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎｔｏ　ｔｈｒｅｅ　ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｅｖｏｌｕ—　

养的习惯，尤其是在育雏阶段。本次从病死鹅分离　

ｔｉｏｎａｒｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｕｓ　Ｇｅｎｅｓ，２００８，３７：５２—５９．　

ＤＨＶ病毒的ＶＰ１基因分析发现，与鸭源病毒间的　

何蚺娅，于淼，张玉玲，等．２００７￣２００９年华南地区鸭肝炎病　

毒流行病学调查及分离株的ＶＰ１基因变异分析ＥＪ３．中国动物　

相似性高。由此推测，雏鹅暴发的鸭病毒性肝炎是　

传染病学报，２０１０，１８（１）：７－１５．　

由混养的患病或带毒鸭传染导致的。　

Ｙａｎｇ　Ｐ　Ｐ，Ｓｏｎｇ　Ｍ　Ｘ，Ａｉ　Ｗ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａ—　

参考文献：　

ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｄｕｃｋ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ　ＥＪ］．　

Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｐｒｅｖ　Ｖｅｔ　Ｍｅｄ，２００６，２８（２）：２１２—２１６．　

Ｅｌｉ　Ｓａｉｆ　Ｙ　Ｍ．禽病学［Ｍ］．苏敬良，高福，索勋，主译．１１版．北　

Ｌｕ　Ｙ　Ｓ，Ｌｉｎ　Ｄ　Ｆ，Ｌｅｅ　Ｙ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　ｂｉｌｌ　ａｔｒｏｐｈｙ　ｓｙｎ～　

京：中国农、　出版社，２００５：３７６．　

ｄｒｏｍｅ　ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ　ｉｎ　ｆｌ　ｃｏ－ｏｕｔｂｒｅａｋ　ｗｉｔｈ　ｄｕｃｋ　ｖｉｒａｌ　

［２］　Ｔｏｄｄ　Ｄ，Ｓｍｙｔｈ　Ｖ　Ｊ，Ｂａｌｌ　Ｎ　Ｗ，ｅｔａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｉｃｋｅｎ　

ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｉｎ　ｄｕｃｋｌｉｎｇ　ｉｎ　Ｔａｉｗａｎ［Ｊ］。Ｅｘｐ　Ｒｅｐ　Ｔｐｒｉａｈ，１９９３，　

ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅ　ｖｉｒｕｓｅｓ，ｄｕｃｋ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　２　ａｎｄ　ｄｕｃｋ　

２９：６３—７Ｏ．　

嘲