溶液配制

2023年12月17日发(作者：性价比高的车)

实验室常用缓冲液配置方案

1×TE Buffer

组成浓度：10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=

配制量：500ml

配制方法：量取下列溶液于500ml烧杯中

1M Tris-HCl Buffer PH= 5ml

EDTA PH= 1ml

向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合；将溶液定容到500ml后，高温高压灭菌；室温保存.

1)1 M Tris-HCl (pH

组份浓度：1 M Tris-HCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 称量 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 加入42ml浓盐酸调节所需要的pH值。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

15） M EDTA

组份浓度： M EDTA

配制量：1 L

配制方法：

称取 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。

3. 用NaOH调节pH值至（约20 g NaOH)。

注意：pH值至时，EDTA才能完全溶解。

4. 加去离子水将溶液定容至1 L。 5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。

6. 室温保存。

实验室常用缓冲液配置方案

1)1 M Tris-HCl , ,

组份浓度：1 M Tris-HCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 称量 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

PH值

浓HCl

约70ml

约60ml

约42ml

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。

2)10×TE Buffer , ,

组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA

配制量：1 L

配制方法：

1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。

1M Tris－HCl Buffer（，，）

500mM EDTA

100ml

20ml

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。

3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。

4. 室温保存。

3) M Tris-HCl 组份浓度： M Tris-HCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 称量 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调节pH值至。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。

4)3 M 醋酸钠

组份浓度：3M 醋酸钠

配制量：100ml

配制方法：

1.称量 NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解

2.加入冰醋酸调节pH值至

3.加去离子水将溶液定容至100ml

4高温高压灭菌后，室温保存。

5)PBS Buffer

组份浓度：137 mM NaCl, mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4

配制量：1 L

配制方法：

1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

NaCl

KCl

Na2HPO4

KH2PO4

8g

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

4. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和 mM MgCl2。

6)10 M 醋酸铵

组份浓度：10 M 醋酸铵 配制量：100 ml

配制方法：

1. 称量 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

3. 使用 mm滤膜过滤除菌。

4. 密封瓶口于室温保存。

注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7)苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)

配制方法：

1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

8）10％ (W/V) SDS

组份浓度：10％ (W/V)SDS

配制量：100ml

配制方法：

1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解

2.滴加浓盐酸调节pH值至

3.将溶液定容至100ml后，室温保存。

9）2 N NaOH

组份浓度：2 N NaOH

配制量：100 ml

配制方法：

1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。

2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。

4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

10） N HCl

组份浓度： N HCl

配制量：100 ml

配制方法：

1. 在 ml的去离子水中加入 ml的浓盐酸（ N)，均匀混合。 2. 室温保存。

11）5 M NaCl

组份浓度：5 M NaCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 称取 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。

3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

11）20％ (W/V) Glucose

组份浓度：20％ (W/V) Glucose

配制量：100 ml

配制方法：

1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

12）Solution I(质粒提取用)

组份浓度：25 mM Tris-HCl（, 10 mM EDTA, 50 mM Glucose

配制量：1 L

配制方法：

1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。

1M Tris-HCl（）

EDTA（）

20％Glucose（）

dH2O

25ml

20ml

45ml

910ml

2. 高温高压灭菌后，4℃保存。

3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。

13）Solution II(质粒提取用)

组份浓度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS

配制量：500ml

配制方法：

1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中

10％ SDS 50ml

2N NaOH 50ml 2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀

3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月

注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌

14）Solution III(质粒提取用)

组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH

配制量：500 ml

配制方法：

1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。

KOAc 147g

CH3COOH

2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。

4. 高温高压灭菌后，4℃保存。

15） M EDTA

组份浓度： M EDTA

配制量：1 L

配制方法：

称取 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。

3. 用NaOH调节pH值至（约20 g NaOH)。

注意：pH值至时，EDTA才能完全溶解。

4. 加去离子水将溶液定容至1 L。

5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。

6. 室温保存。

16）1 M DTT

组份浓度：1 M DTT

配制量：20 ml

配制方法：

1. 称取 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。

2. 加20 ml的 M NaOAc（，溶解后使用 mm滤器过滤除菌。

3. 适量分成小份后，-20℃保存。

17）10 mM ATP 组份浓度：10 mM ATP

配制量：20 ml

配制方法：

1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。

2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（，搅拌溶解。

3. 适量分成小份后，-20℃保存。

一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于水中（为减少变性，

须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇

至微量离心管，加的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：溶解氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至，再加水定容到100ml。

L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：将溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：加的浓盐酸至的水中。

25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:溶解 MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹

或贮存于-20℃。 20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH ）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）

5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）

％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂（Denhardt\'s regent）

成分及终浓度

2％聚蔗糖（Ficoll，400型）

2％聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）

2％BSA（组分V）

水

配制100ml溶液各成分的用量

2g

2g

2g

加水至总体积为100ml

依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）

成分及终浓度

L Tris-HCl

100mmol/L MgCl2

100mmol/L DTT

2mmol/L ATP

5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）

ml BSA（组分V）（可选）

水

配制10ml溶液各成分的用量

5ml 1mol/L 贮液

1ml 1mol/L 贮液

1ml 1mol/L 贮液

200ul 100 mmol/L 贮液

50ul 1 mmol/L 贮液

10 mg/mL 贮液

将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。

100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions） 可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/L dNTP混合液

成分及终浓度

10mmol/L dATP

10mmol/L dCTP

10mmol/L dGTP

10mmol/L dTTP

水

配制20ul溶液各成分的用量

2ul 100 mmol/L dATP 贮液

2ul 100 mmol/L dCTP 贮液

2ul 100 mmol/L dGTP 贮液

2ul 100 mmol/L dTTP 贮液

12ul

20％PEG 8000/ NaCl

成分及终浓度

质量浓度为20％聚乙二醇

L 氯化钠

水

配制10ml溶液各成分的用量

20g

50ml 5 mol/L 氯化钠 或 固体氯化钠

补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC

成分及终浓度

300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）

3mol/L 氯化钠

水

配制1L溶液各成分的用量

补足1L

溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水

加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionized formamide）

直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphate buffer）

按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L 磷酸二氢钠（ml）

1mol/L 磷酸氢二钠（ml）

最终pH值 877

850

815

775

735

685

625

565

510

450

390

330

280

123

150

185

225

265

315

375

435

490

550

610

670

720

TE（用于悬浮和贮存DNA）

成分及终浓度

10mmol/L Tris－HCl

1mmol/L EDTA

水

配制100ml溶液各成分的用量

1ml 1mol/L Tris-HCl（，25℃）

200ul mol/L EDTA（pH ）

Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）

将121g的Tris碱溶解于约水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（），用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml）

14

21

38

46

56

66

76

pH

二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液 成分及终浓度

2mol/L Tris碱

1mol/L 乙酸

100 mmol/L EDTA

水

配制1L溶液各成分的用量

242g

ml的冰乙酸（ mol/L）

200ml的 mol/L EDTA（pH ）

补足1L

5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度

445 mmol/L Tris碱

445 mmol/L 硼酸盐

10 mmol/L EDTA

水

配制1L溶液各成分的用量

54g

硼酸

20 ml的 mol/L EDTA（pH ）

补足1L

染料

1％溴酚蓝（bromophenol blue）

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）

溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）

小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液（gel loading solutions）

6×碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

N 氢氧化钠

6 mmol/L EDTA

18％聚蔗糖（400型）

％溴甲酚绿

％二甲苯青FF

水

配制10ml溶液各成分用量

300ul 10N 氢氧化钠

120ul L EDTA（）

15mg

25mg

补足到10ml

6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

％溴酚蓝

％二甲苯青FF

5 mmol/L EDTA

15％聚蔗糖（400型）

配制10ml溶液各成分用量

1％溴酚蓝

1％二甲苯青FF

100ul L EDTA（）

水

补足到10ml

6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

％溴酚蓝

％二甲苯青FF

15％聚蔗糖（400型）

水

配制10ml溶液各成分用量

1％溴酚蓝

1％二甲苯青FF

补足到10ml

6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）

成分及终浓度

％溴酚蓝

％二甲苯青FF

5 mmol/L EDTA

50％甘油

水

配制10ml溶液各成分用量

1％溴酚蓝

1％二甲苯青FF

100ul L EDTA（）

3ml

6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

％溴酚蓝

％二甲苯青FF

5 mmol/L EDTA

40％聚蔗糖

水

配制10ml溶液各成分用量

1％溴酚蓝

1％二甲苯青FF

100ul L EDTA（）

4g

补足到10ml

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

％溴酚蓝

％二甲苯青FF

200 mmol/L EDTA

％SDS

50％甘油

水

配制10ml溶液各成分用量

20mg

20mg

4ml L EDTA

100ul 10％ SDS

5ml

补足到10ml

三.常用培养基

LB培养基

将下列组分溶解在水中：

蛋白胨

酵母提取物

10g

5g 氯化钠

10g

如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

SOB培养基

将下列组分溶解在水中：

蛋白胨

酵母提取物

氯化钠

1 mol/L 氯化钾

20g

5g

用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

SOC培养基

成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用的滤膜过滤除菌）。

TB培养基

将下列组分溶解在水中：

蛋白胨

酵母提取物

甘油

12g

24g

4ml

各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ mol/L K2HPO4的溶液（的KH2PO4和溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用的滤膜过滤除菌）。

2×YT培养基

将下列组分溶解在水中：

蛋白胨

酵母提取物

氯化钠

16g

10g

4ml

如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

YPD培养基

将下列组分溶解在水中：

蛋白胨

20g 酵母提取物

葡萄糖

10g

20g

用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素

氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）

溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

溶解羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）

溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）

溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）

溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素（streptomycin）（50mg/ml）

溶解链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）

溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素（tetracyyline）（10mg/ml）

溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

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