2024年3月21日发(作者：汽车陪练app)

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ｌ６９４　?　

国际检验医学杂志２０１１年９月第３２卷第ｌ５期Ｊｊ１ｌ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，￣．，ｐｔｅｍｂｅｒ　２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．】５　

?

基础实验研究?　

Ｔ淋巴细胞亚群绝对值测定ＣＤ４５／ＳＳＣ设门法和　

ＣＤ３／ＳＳＣ设门法的比较研究　

欧阳红梅，张　芹，蒋雅先，朱红艳，甸自金，宋建新　

（昆明医学院附属昆华医院／云南省第一人民医院检验科，昆明６５００３２）　

摘　要：目的　比较流式细胞仪两种设门方法测定外周血中Ｔ淋巴细胞亚群绝对值的差异。方法　收集２０例患者的外周　

全血，分别采用ＣＤ４５／ＳＳＣ、ＣＤ３／ＳＳＣ两种设门方法测定Ｔ淋巴细胞亚群的百分率和绝对值，将同一标本测得的两个结果进行配　

对ｔ检验，并对Ｔ淋巴细胞亚群绝对值做进一步分析，计算其线性方程。结果　两种方法测得的ＣＩ）３　、ＣＤ３　ＣＩ）４　淋巴的绝对　

值差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５）；但ＣＤ３　ＣＤ８。。淋巴的绝对值差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。两种方法测定ＣＤ３　、ＣＤ３　ＣＩ），Ｉ、　

ＣＤ３　ＣＤ８　淋巴绝对值的相关性良好。结论　两种方法测定ＣＤ３　、ＣＤ３　ＣＤ４’。淋巴的绝对值结果一致，均可作为ＣＤ３、ＣＤ４细　

胞绝对值的测定方法，并且可以相互补充。　

关键词：流式细胞术；　Ｔ淋巴细胞亚群；　绝对计数　

ＤＯＩ：１０．３９６９／Ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３　４ｌ３Ｏ．２０１１．１５．０ｌ７　文献标识码：Ａ　文章编号：ｌ６７３　４１３Ｏ（２Ｏ１１）ｌ　５ｌ＿ｌ６９４　０２　

Ｃｏｍｐａｒｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ４５／ＳＳＣ　ａｎｄ　ＣＤ３／ＳＳＣ　ｇａｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｎ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｃｏｕｎｔ　ｏｆ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｓｅｔｓ　

Ｏｕｙａｎｇ　Ｈｏｎｇｍｅｉ，Ｚｈａｎｇ　Ｑｉｎ，Ｊｉａｎｇ　Ｙａｘｉａｎ，Ｚｈｕ　Ｈｏｎｇｙａｎ，Ｄｉａｎ　Ｚｉｊｉｎ，Ｓｏｎｇ　Ｊｉａｎｘｉｎ　

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＡｆＪｉｌｉａｔｅｄ　Ｋｕｎｈｕａ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　０／Ｋｕｎｍｉｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ／ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ｐｅｏｐｌｅ　

Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｙｕｎｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙ“ｎｎⅡ　６５００３２，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｗｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇａｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｃｏｕｎｔ　ｏｆ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｓｅｔｓ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　

ｂｌｏｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　２０　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　１）ｙ　ｕｓｉｎｇ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（Ｆ（　Ｍ）ｗｉｔｈ　ＣＩ）４５／　

ＳＳＣ　ａｎｄ　ＣＤ３／ＳＳＣ　ｇａｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｆｏｒ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ａｎｄ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｃｏｕｎｔ　ｏｆ　Ｔ～ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｓｅｔｓ．Ｔｗｏ　ｒｅｓｕｌｔｓ。ｄｅｔｅｃｔｃｄ　ｂｙ　

ｔｗｏ　ｇａｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｓａｍｐｌｅ，ｗｅｒｅ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｐａｉｒｅｄ　ｔ　ｔｅｓｔ．Ｔｈｅ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ　ｏｆ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　Ｔ　

ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅｒｅ　ｗｅｒｅ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｃｏｕｎｔｓ　ｏｆ（　【）３。。ａｎｄ　ＣＩ）３　（７Ｉ）４　ｃｅｌｌｓ　ｄｅ　

ｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｐ＞Ｏ．Ｏ５）．Ｂｕｔ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｃｏｕｎｔｓ　ｏｆ　ＣＤ３　ＣＤ８　ｃｅｌｌｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　

Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｆｉｎｅ　ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｇａｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｃｏｕｎｔｓ　ｏｆ　ＣＤ３　ａｎｄ　ＣＩ）３　（　Ｉ）４　ｃｅｌｌｓ，　Ｉ、ｈｅｓｅ　ｌｗｏ　ｇａ　

ｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｏｔｈ　ｕｓｅｄ　ａｎｄ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　ｆｏｒ　ｅａｃｈ　ｏｔｈｅｒ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｃｏｕｎｔｓ　ｏｆ　ＣＤ３　ａｎｄ　ＣＩｉ）４　ｃｅｌｌｓ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；Ｔ～Ｉ　ｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｓｅｔｓ；　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｃｏｕｎｔ　

流式细胞术（ＦＣＭ）是综合应用光学、机械学、流体力学、　ＥＰＩＣＳ　ＸＩ　流式细胞仪，日本Ｓｙｅｓｍｅｘ公司的ＳＥ　９０００全自动　

电子计算机、细胞生物学、分子免疫学等学科技术，以高能量激　

光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，｝贝０量　

其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞或亚细胞进行　

快速定量测定和分析的方法。ＦＣＭ计数血液Ｔ淋巴细胞亚　

群已成为临床医学中最常用的检查项目之一，对于评价机体　

的免疫功能、诊断与监测免疫性疾病如艾滋病、原发性免疫缺　

血细胞计数仪；所用荧光标记抗体包括ＣＩ）３　ＦＩＴＣ、ＣＩ）４　ＰＥ、　

ＣＤ８一ＰＥ、ＣＤ４５　ＰＥ—Ｃｙ５和溶血剂均为美国Ｂｅｃｋｍａｎ　Ｃｏｕｌｔｅｒ公　

司产品。　

１．３方法　

１．３．１　外周血淋巴细胞亚群测定　全自动血细胞计数仪测定　

患者外周血，记录白细胞绝对值及淋巴细胞绝对值，然后加入　

陷病、严重急性呼吸综合征（ＳＡＲＳ）、自身免疫病、恶性肿瘤、器　

官移植等具有重要意义ｌ】　］。然而，血液淋巴细胞亚群计数的　

方法较多，所涉及的多种因素均可直接或间接的影响分析结果　

的准确度和精密度［５］。利用多个荧光探针标记淋巴细胞表面　

的不唰表型，从而实现了对淋巴细胞同源亚型分析和绝对计　

磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）凋整白细胞浓度至（１～６）×１０　／Ｉ　。ｌＪＪ【１人　

ＣＤ４５一ＰＥ　Ｃｙ５和ＣＤ３一ＦＩＴ（；单克隆抗体１０　Ｉ　，再分别加入　

ＣＤ４一ＰＥ、ＣＤ８一ＰＥ单克隆抗体ｌ０　Ｉ　，在每管中加入细胞混悬　

液５Ｏ　Ｉ　。摇匀后室温下避光孵育２０　ｍｉｎ，溶血后Ｉ　饥分析。　

１．３．２　ＣＤ４５／ＳＳＣ设¨法以ＣＤ４５为横轴，侧广口Ｊ角（ＳＳＣ）为　

数　，通常采用双平台法和单平台法，但是单平台法试剂成本　

纵轴，从流式细胞仪上可显示＃ｂＮ血中性粒细胞群、单核缃胞　

较高，而双平台法所用的仪器现在大多实验室都能满足且试剂　

成本较低，故双平台法容易被很多实验室接受。目前常采用　

ＦＳＣ／ＳＳＣ、ＣＤ４５／ＳＳＣ和ＣＤ３／ＳＳＣ　３种设门方法。为研究哪一　

种双平台法更适合用于外周全血的分析，笔者采用ＣＤ４５／ＳＳＣ　

和ＣＤ３／ＳＳＣ两种不同设门方法，拟对外周全血淋巴细胞亚群　

行比较。　

１资料与方法　

群、淋巴细胞群，设白细胞群为Ｅ¨，淋巴细胞群为Ａ门。从　

Ａ门可获取ＣＤ３　、ＣＤ３　ＣＩ）４　、ＣＤ３　ＣＤ８　细胞的酉分率。　

１．３．３　ＣＤ３／ＳＳＣ设门法　以ＣＤ３为横轴，ＳＳＣ为纵轴，设自　

细胞群为Ｅ门，ＣＤ３淋巴细胞群为Ｆ门。　

１．４统计学处理采用ＳＰＳＳ１１．５统计软件，数据变量以　±　

ｓ表示，组间数据比较采用ｔ检验，相关分析采用相关性检验，　

以ａ一０．０５作为检验水准。　

２　结　果　

１．１　一般资料　随机抽取云南省第一人民医院２Ｏ例门诊患　

者的外周静脉血２　ｍＩ　（ＥＤＴＡ—Ｋ。抗凝），无凝血或溶血现象。　

１．２仪器与试剂　采用美国Ｂｅｃｋｍａｎ　Ｃｏｕｌｔｅｒ公司生产的　

２．１　两种方法测得的２ｏ例患者的结果比较　两种设『１　Ｊ力‘法　

所测得的ＣＤ３和ＣＤ４细胞绝对值差异无统计学息义（Ｊ　

国际检验医学杂志２０１１年９月第３２卷第ｌ５期Ｉｎｔ　Ｊ　Ｉ　Ｍｅｄ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．１５　

０．０５），而采用ＣＤ４５／ＳＳＣ设门法测得的ＣＤ８细胞绝对值高于　

ＣＤ３／ＳＳＣ设门法，差异有统计学意义（Ｐ一０．０１１），见表１。　

表１　ＣＤ４５／ＳＳＣ与ＣＤ３／ＳＳＣ设门法检测淋巴　

ＣＤ３／ＳＳＣ设门法可以将ＣＤ３　细胞和ＣＤ３细胞清楚地区分　

开，因此该设门法具有更高的准确性。目前大多实验室都采用　

ＣＤ４５／ＳＳＣ和ＣＤ３／ＳＳＣ设门法对淋巴细胞亚群绝对值进行分　

析，但对两种方法的结果比较尚未见报道。本实验结果显示，　

ＣＤ４５／ＳＳＣ和ＣＤ３／ＳＳＣ设门法测定ＣＤ３　、ＣＤ３　ＣＤ４　细胞绝　

细胞亚群结果比较　

对值差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５），其结果相关性良好＿７］。　

笔者发现，ＣＤ３／ＳＳＣ设门法得到的数据比较有限，较　

ＣＤ４５／ＳＳＣ设门法可提供的信息少。比如ＣＤ３　、ＣＤ４　、ＣＤ８　

细胞占淋巴细胞的比例在ＣＤ３／ＳＳＣ设门中无法得知（见表　

１），因此，笔者建议在一般情况下采用ＣＤ４５／ＳＳＣ设门法。但　

无数据。　

ＣＤ４５／ＳＳＣ设门法也有缺陷性¨８　：当淋巴细胞群与其他细胞　

群分离不佳时，很难将所有淋巴细胞都区分出来，这时只有采　

对相关　用ＣＤ３／ＳＳＣ设门法才能将ＣＤ３’。细胞和ＣＤ３～细胞分离开来。　

目前，实验室常常结合使用ＣＤ４５／ＳＳＣ和ｃＤ３／ｓｓｃ两种设门　

方法进行分析。在本实验中也发现，用ＣＤ３／ＳＳＣ设门法时，有　

些细胞会出现ＣＤ３弱表达，在散点图中ＣＤ３　、ＣＤ３一细胞群　

会连在一起，很难将ＣＤ３　细胞准确地区分出来，但这种情况　

出现的概率远低于ＣＤ４５／ｓｓｃ设门法。可见，ＣＤ４５／ＳＳＣ、　

２．２两种设门方法测定结果的线性方程及相关系数

设门方法所测得的绝对值结果性关系良好。见表２。　

表２　

系数（ｒ）进行相关性分析，结果Ｐ均小于０．０５，表明采用两种　

ＣＤ４５／ＳＳＣ与ＣＤ３／ＳＳＣ设门检测淋巴细胞　

亚群绝对值的相关性分析　

ＣＤ３／ＳＳＣ设门方法各有优缺点，在实际工作中可相互结合、互　

为补充。　

参考文献　

３讨　论　

［１］Ｍａｉｎｏ　ＶＣ，Ｐｉｃｋｅｒ　Ｉ　Ｊ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｓｕｂｓｅｔｓ　ｂｙ　ｆｌｏｗ　

ｅｙｔｏｍｅｔｒｙ：ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｙ—　

ｔｏｍｅｔｒｙ，１９９８，３４（５）：２０７—２１５．　

利用ＦＣＭ分析血液标本中Ｔ淋巴细胞亚群的方法很多，　

常用的有ＦＳＣ／ＳＳＣ、ＣＤ４５／ｓｓｃ和ＣＤ３／ＳＳＣ设门法等。ＦＳＣ／　

ＳＳＣ设门法是利用细胞的前向散射角和侧向散射角即光散射　

物理特性来设门识别淋巴细胞。这种设门方法由于没有考虑　

［２］王建中．流式细胞分析在严重急性呼吸综合征临床研究中的应用　

［Ｊ］．中国医疗器械杂志，２００３，９（３）：１　９－２１．　

［３］李太生，邱志峰，韩杨，等．严重急性呼吸综合征急性期Ｔ淋巴细　

胞亚群异常改变口］．中华检验医学杂志，２００３，２６（５）：２９７　２９９．　

Ｅ４］王建中，王淑娟．当前临床式细胞分析的发展趋势［Ｊ］．中华检验　

医学杂志，２００２，２５（１）：５－７．　

细胞的生物学特性，容易受到多种因素如有核红细胞、单核细　

胞、小的粒细胞、嗜碱性粒细胞等的干扰，无法将具有相同光散　

射特性的淋巴细胞和干扰杂质准确区别开来，使淋巴细胞百分　

率计算不准确而常导致分析结果产生误差。　

［５］ＮＣＣＩ　Ｓ．Ｈ４２一Ｔ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ：ｑｕａｌｉｔｙ　ａｓ　

ｓｕｒａｎｃｅ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ　ｏｆ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　

引入ＣＤ４５、ＣＤ３单克隆抗体测定Ｔ淋巴细胞亚群绝对值　

是基于细胞的生物学特性，使用多参数ＦＣＭ分析。许多学者　

证实，ＣＤ４５是一种表达于白细胞的分化抗原，造血系统细胞　

ＣＤ４５的荧光强度（ＦＩ）与细胞分化程度有关，即分化程度高的　

成熟白细胞，其ＣＤ４５的ＦＩ也高，分化程度低的细胞其ＦＩ也　

低，而红系细胞的ＦＩ最低。在成熟白细胞中，各类细胞ＣＤ４５　

的ＦＩ亦不相同，其中淋巴细胞和单核细胞的ＦＩ高于中性粒细　

Ｅｓ］．Ｗａｙｎｅ　ＰＡ：ＮＣＣＩ　Ｓ，１９９２．　

［６］Ｂ６ｎ６　ＭＣ，Ｋｏｌｏｐｐ　Ｓａｒｄａ　ＭＮ，Ｅｌ　Ｋａｉｓｓｏｕｎｉ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ａｕｔｏｍａｔｅｄ　ｃｅｌｌ　

ｃｏｕｎｔ　ｉｎ　ｆｌｏｗ　ｅｙｔｏｍｅｔｒｙ：ａ　ｖａｌｕａｂｌｅ　ｔｏｏｌ　ｔｏ　ａｓｓｅｓｓ　ＣＩ）４　ａｂｓｏｌｕｔｅ　

ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｃａｉｎ　Ｐａｔｈｏｌ，１９９８，１１０（３）：　

３２１　３２６．　

［７］吴丽娟．临床流式细胞学检验技术［Ｍ］．北京：人民军医出版社，　

２０１０：２３　２５．　

胞。因此，根据各类细胞ＣＤ４５的ＦＩ和颗粒密度不同，采用　

ＣＤ４５／ＳＳＣ设门法可以将原始细胞（低ＦＩ、低或高ＳＳＣ）、淋巴　

细胞（高ＦＩ、低ＳＳＣ）、单核细胞（高Ｆ１、中等ＳＳＣ）、中性粒细胞　

（低ＦＩ、高ＳＳＣ）、红系细胞（最低Ｆ】、低或高ＳＳＣ）和细胞碎片　

（最低ＦＩ、最低ＳＳＣ）清楚地区分开。ＣＤ４５／ＳＳＣ设门法是以　

ＣＤ４５在细胞膜表达强度及颗粒的多少来区分细胞群，设定的　

细胞群为ＣＤ４５高表达、低ＳＳＣ的淋巴细胞，排除了非淋巴细　

胞的影响，从而保证了所分析的全是淋巴细胞。ＣＤ３是一种　

表达于Ｔ淋巴细胞的分化抗原，具有更高的特异性，采用　

［８］赵广玲，许洪志，黄敏，等．骨髓增生异常综合征和再生障碍性贫　

血患者骨髓原始细胞免疫表型分析口］．山东大学学报：医学版，　

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［９］姚志娟，廖丽，党永辉，等。Ｉ８０例急性白血病流式细胞术免疫分型　

的特点分析［Ｊ］．中国实验血液学杂志，２００４，１２（１）：８３—８５．　

［１ｏ］陈珊珊．流式细胞术用于临床检验中得一些问题［Ｊ］．中华检验医　

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（收稿日期：２０１卜Ｏ６—１Ｏ）　

（上接第１６９３页）　

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用机制［Ｊ］．江西畜牧兽医杂志，２００６（４）：２－４．　

［９］吴丽娟．临床流式细胞学检验技术［Ｍ］．北京：人民军医出版社，　

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降钙素原水平的研究［Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１ｏ，３１（ＩＯ）：１１１０—　

１　１　１　１　

（收稿日期：２０１１－０６—１Ｏ）　

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淋巴细胞,细胞,分析,设门,采用,方法