先天性心脏病与血管内皮生长因子

2023年11月24日发(作者：丰田卡罗拉纯电动汽车)

先天性心脏病与血管内皮生长因子-634G＞C 的相关性研究

杨明远;徐光;王玉妍

【期刊名称】《中国实验诊断学》

【年(卷),期】2015(000)010

【总页数】3页(P1749-1751)

【作 者】杨明远;徐光;王玉妍

【作者单位】长春市儿童医院 心胸外科，吉林 长春 130051;吉林大学第一医院 感

染科;吉林大学中日联谊医院

【正文语种】中 文

先天性心脏病（congenital heart disease，CHD）是先天性畸形中最常见的一类，

约占各种先天畸形的28%，它是指在胚胎发育时期由于心脏及大血管的形成障碍

或发育异常而引起的解剖结构异常，或出生后应自动关闭的通道未能闭合（在胎儿

属正常）的情形。先天性心脏病发病原因很多，以遗传因素和环境因素为主。血管

内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是血管内皮细胞特

异性的肝素结合生长因子，可在体内诱导血管新生［1］。本研究通过检测血清中

血管内皮生长因子基因多态性位点－634G＞C的单核苷酸多态性，探讨先天性心

脏病与血管内皮生长因子－634G＞C基因型的相关性。

1.1 临床资料

病例组为长春市儿童医院心外科收治的先天性心脏病患儿77例，其中男41例，

女36例，年龄为6月龄－13岁，所有患儿均经过查体、超声心动图及手术明确

诊断。对照组为长春市儿童医院门诊体检健康儿童共75例，其中男38例，女37

例，年龄为5月龄－12岁，均经过超声检查已除外CHD，并且无其他先天性疾病

或肿瘤，肝、肾功能均正常。所有对象均为汉族，两组年龄，性别差异均无显著性

（P＞0.05）。

1.2 排除标准

具有以下一项者为排除病例，①新生儿期婴儿，卵圆孔未闭及动脉导管未闭存在，

因两者仍有自行闭合的可能，不作为研究样本；②CHD患儿出现艾森曼格综合征，

肺动脉压力极高，心内缺损的血流方向发生改变，血流动力学与未出现艾森曼格综

合征的CHD患儿有差异，所以不作为研究样本；③CHD患儿合并有染色体疾病，

如唐氏综合征，不作为研究样本。

1.3 方法

1.3.1 目的基因的提取和扩增 病例组及对照组患儿清晨空腹6小时以上，采集静脉

血2ml，EDTA抗凝管保存，采集后2小时内，离心机3 500转／分，离心5分

钟，抽出血浆，置2ml离心管中。血细胞及血浆均在－80℃冰冻保存。饱和酚－

氯仿法提取DNA。Taqman探针检测VEGF－634G＞C的单核苷酸多态性。①紫

外光／可见光分光光度法测定样本的DNA含量。②选择反应体系20μl：2XTaq

－Man Master Mix 10μl，40XTaqman SNP Assays 0.5μl，样本DNA3μl，无

核酸酶水6.5μl。③使用7500型实时荧光定量PCR仪，Taqman探针工作：步骤

1：初活化50℃2min，步骤2：活化95℃10 min，步骤3：变性95℃15sec：，

步骤4：退火／延伸60℃1min，步骤3和步骤4循环40次。④读取数据及生成

结果图。

1.3.2 统计学方法 用SPSS 19.0软件进行统计学处理，对数据进行正态性检验，计

量资料用x—±s表示。样本的均数比较，首先检验方差齐性，然后采用t检验。

两组间比较采用成组χ2检验，P＜0.05为有统计学差异。

2.1 VEGF－634G＞C的基因型

通过单核苷酸多态性检测，病例组和对照组的基因型有：纯合子GG型，杂合子

GC型，纯合子CC型，见图1－3。如仅有红色曲线抬升，绿色曲线水平，基因型

为纯合子GG型；如红色曲线和绿色曲线均有抬升，基因型为杂合子GC型；如红

色曲线水平，绿色曲线抬升，基因型为纯合子CC型。

2.2 病例组和对照组VEGF－634G＞C等位基因频率的比较

病例组共有样本77个，－634G＞C多态性位点等位基因总数为154个，其中G

基因103个，C基因51个；对照组共有样本75个，－634G＞C多态性位点等位

基因总数为150个，其中G基因114个，C基因36个。两组等位基因G／C频

率经χ2检验，χ2＝1.55，P＞0.05，差异无显著性，见表1。

2.3 病例组和对照组基因型GG、GC和CC频率的比较

病例组的基因型为三种，分别为：GG型38例，GC型27例，CC型12例；对

照组基因型也为三种，分别为：GG型53例，GC型8例，CC型14例。病例组

与对照组三种基因型的分布经χ2检验，χ2＝12.16，P＜0.05，差异有显著性，

见表2。

2.4 VEGF－634G＞C基因型与CHD易感性

比数比（OR）：指病例组中暴露人数与非暴露人数的比值除以对照组中暴露人数

与非暴露人数的比值。比数比是反映疾病与暴露之间关联强度的指标。如果OR＜

1，说明疾病的相对危险度低，如果OR＞1，说明疾病的相对危险度高。本研究的

病例组和对照组中，VEGF－634G＞C的基因型分为：GG型为91例、GC型35

例、CC型26例。其中两组的GC型所占比例差异性大。GG型OR值为0.4，GC

型OR值为4.5，CC型OR值为0.8。这说明在3种基因型中，GC基因型最易导

致CHD的发生，它可能是CHD的易感基因型。见表3。

CHD是小儿先天性畸形疾病中最常见的一类，并且也是小儿最常见的心脏病。我

国CHD的发生率为6‰－8‰。近些年，CHD的发病率有逐渐上升的趋势［2］。

CHD被认为是一种复杂性状疾病，它的形成原因主要与下列因素有关：1、遗传

因素（内在因素）：如单基因突变，染色体畸变，多基因病变和先天性代谢紊乱；

2、环境因素（外在因素）：孕早期风疹病毒感染，柯萨奇病毒感染，孕期摄取锂

盐，糖尿病，酗酒，过量辐射，药物，高龄孕妇，高原地区生活等。VEGF是调节

心脏血管生长发育的重要因子之一。VEGF－634G＞C多态性位点的突变，与

CHD的形成密切相关［3］。

在本研究中发现，CHD患儿和健康儿童的VEGF－634G＞C的基因型均为三种：

GG型，GC型和CC型。虽然两组的G／C等位基因频率无差异，但是两组基因

型的分布有明显差异。其中，GC型在两组的差异性较大，并且GC型引起CHD

的比数比为4.5，其余两型的比数比均＜1。所以，GC型可能是CHD发病的易感

基因型。原因可能是：－634G＞C的不同的基因型其生理活性不同［4］。－

634C的生理活性强于－634G。有研究发现，－634C可能会影响内部核糖体进入

位点（IRES），使其表达增加。这样，VEGF的表达发生异常。另外有研究发现，

VEGF影响心脏血管发育主要是受到VEGF的特异性受体控制：VEGF受体－1和

VEGF受体－2［5］。这两种受体作用的协同效应，构成了新的血管形成的基础。

VEGF的表达异常，可能与VEGF受体－1和VEGF受体－2结合程度就会有差异，

导致内皮细胞的通透性发生变化，VEGF浓度的改变影响了心血管的发育，可能导

致CHD的形成［6］。总之，在胚胎期心脏发育阶段，VEGF对心脏发育在时间

上和空间上有非常准确的调控。一旦多态性位点－634G＞C发生突变，就有可能

导致VEGF的表达异常，血中VEGF的浓度发生改变，影响VEGF对于心脏发育

的调控，最终导致CHD的出现［7］。

在胚胎期，VEGF－634G＞C的基因突变后，影响了VEGF的表达。但是每个胎儿

受到的影响的程度不尽相同，有的胎儿影响程度较轻，VEGF的浓度变化小，或者

在正常范围内［8］。所以，这类的胎儿在发育过程中，心脏的发育仍然会按照正

常的胎儿发育，没有形成CHD。同样，有的胎儿由于在胚胎时期，VEGF的表达

受到的影响较大，VEGF的浓度低于或超过了正常范围，导致心脏的发育异常，最

终形成了CHD［9］。因此，即使VEGF的多态性位点－634G＞C发生了突变，

并且产生了易感CHD的基因型，但是也不一定形成CHD。至于VEGF基因突变

后的具体的浓度变化，以及浓度变化对胚胎影响程度，有待于进一步研究［10］。

本研究仍有需要完善的地方：实验中两组的样本量小，无法对CHD进行分型研究；

实验样本采集受到了国籍、地域及种族、环境的限制；VEGF有多个多态性位点。

本实验只是针对－634G＞C这一个位点进行了探讨；实验中的样本未采集父母的

血样，对评估CHD的遗传因素可能会有的影响。

本研究仅证明了VEGF－634G＞C的基因型与CHD的形成有相关性。但尚不能据

此诊断胎儿是否患有CHD，也未探讨针对CHD形成的机制如何进行基因治疗。

同时，鉴于CHD的形成有多种因素参与，多个基因位点的突变都有可能对CHD

的形成机制产生影响［11］。所以，我们下一步可能需要扩大研究范围，探讨多

基因变异的相互作用及其影响，在更深层次，更广区域研究CHD的形成机制以及

如何有效的进行基因干预以减少发病率和死亡率。随着科学技术的发展，研究

VEGF和CHD的进程可以与分子生物学，遗传学，环境学等学科相结合，为CHD

的早期诊断及治疗提供理论依据和实践支持。

【相关文献】

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