2023年12月31日发(作者：上海车展在哪里举办)

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倒置荧光显微镜

操作规程

Olympus IX5

厦门大学医学院中心实验室

黄静茹

2016年10月

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说明：

①透射光主开关；②汞灯高压电源开关；③透射光光强控制钮；④滤色片架；

⑤光路选择杆；⑥X轴和Y轴调节钮；⑦物镜转盘；⑧粗/微调焦旋钮；

⑨双目观察筒；⑩屈光度调节环；?聚光镜高度调节钮；?聚光镜对中旋钮；

?视场光阑调节杆；?孔径光阑调节杆；?聚光镜转盘；?荧光光闸（SHUTTER）；

?荧光激发块转盘；?荧光减光阀

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一、开机

1、 打开透射光源（白光）主开关①；

2、 打开荧光光源（汞灯高压电源）②；

3、 打开电脑，进入 cellSens Standard工作站；

备注：标本为HE染色、免疫组化时，不需要打开荧光光源；标本为荧光染料染色时，一般也不需要打开白光光源。

二、明场观察（Bright Field BF）

1、正确放置标本，BF主要用于HE染色、免疫组化标本；

2、转动荧光激发块转盘?到“6”的位置；

3、转动聚光镜转盘?到“BF”位置，直到听到咔嗒声；

4、将光路选择杆⑤推进去（ 选择目镜观察光路）；

5、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜，调节白光光强控制钮③至合适的强度， 调

节粗/细调焦旋钮⑧聚焦观察,根据需要调节瞳间距⑨和屈光度⑩；

三、相衬观察（Phase contrast PH)

1、正确放置标本，PH主要用于没有任何染色的、较透明的标本；

2、转动荧光激发块转盘?到“6”的位置；

3、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜；

4、转动聚光镜转盘?，使相衬光学元件与所用物镜相匹配（见表1）；

5、将光路选择杆⑤推进去（ 选择目镜观察光路）；

6、调节光强控制钮③直至合适的强度，调节粗/细调焦旋钮⑧进行聚焦观察,根

据需要调节瞳间距⑨和屈光度⑩。

表1： 物镜、相差元件匹配表

物镜

相差元件

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4X

PHL

10X、20X

PH 1（PH C）

40X

PH 2

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四、荧光观察

1、如果需要，可先用明场观察对标本定位，再转入荧光观察；

2、如果不再需要BF观察，可关闭白光电源②；或将白光光强调节钮③逆时针旋

至最低，将孔径光阑向右拨至最小；

3、转动荧光激发块转盘?，根据所用的荧光染料选择匹配的荧光激发块；

表2：荧光激发块

序号 激发块名称 激发光λ（nm） 发射光λ（nm） 滤掉光λ（nm）

1

2

3

4

5

6

WU

WB

WG

WBV

WIY

BF

330-385

450-480

510-550

400-440

545-580

420

515

590

475

610

明场、相差

＜400

＜500

＜570

＜455

＜600

4、打开荧光光闸?（SHUTTER），使其置于“O”位置；

5、将光路选择杆⑤推进去（ 选择目镜观察光路）；

6、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜，调节粗/细调焦旋钮⑧聚焦观察，根据荧

光强度选择合适的ND滤镜（荧光减光阀）?进入光路。（第一个ND100：100%

的荧光强度进入光路；第二个ND6：6%的荧光强度进入光路，第三个ND25: 25%

的荧光强度进入光路）。

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五、CCD成像

1、cellSens Standard工作站中，,点击右侧摄像控制中的实时观察；

2、将光路选择杆⑤拉出（

3、曝光：可先选择自动曝光，参照自动曝光时间，再通过手动调节曝光时间使

图像更清晰；

4、背景校准：进行明场和相差成像时执行白平衡 ，荧光成像时执行黑平

衡， 在样品空白背景处画一个小区域，软件自动以该处为背景对整幅

图像进行调整，使所选区域显示为白色或黑色；

5、各成像参数设定完毕后，点击拍照 ，仪器自动成像；

6、右键文档工具栏窗口或在文件处进行保存（TIF或JPG格式）。

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，CCD成像光路），调节粗/细调焦旋钮进⑧行聚焦；

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六、关机

1、实验完毕，先退出工作站；

2、将透射光光强调节钮③逆时针旋至最低，关闭透射光主开关（TH4）①；

3、确认汞灯开启超过0.5h，方能关闭汞灯高压电源②；

4、用无水乙醇擦拭镜头，并将物镜转盘转至空位，清理载物台及桌面；

5、刻录数据：放入全新光盘，将数据发送至光盘，电脑右下角出现刻录提示，

点击该提示进入，确认待刻录数据，点击“刻录到光盘”----下一步，刻录

完毕，光盘自动退出。

6、关电脑及显示器。

七、图像处理

1、标尺：在工具栏上选择正确的物镜倍数，点击“视图”---标尺，软件自动将

标尺加在图像上，再点击“图像”----印入信息，保存即可。

2、测量：点击“测量”----测量工具，软件左侧显示出测量工具栏，点击选择

所需的测量工具，在图像上画目标区域，右键点击结束测量即可显示结果。 测

量结果可导出Excel：点击测量工具栏图标 。

3、图像叠加：打开拟叠加的图，“图像”----组合彩色图像----“可用图像”中

选择拟叠加的图----√合并层----确认。

4、图像拼接：按一定顺序 拍摄图像，相邻两张图像的边缘要部分重叠，

所有图像拍摄完毕后，选择视图---工具---画廊---全选拟拼接的图像，选择

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运算---图像拼接---设置水平方向图像数量---根据拍摄顺序摆好图像位置

---确定；预览后视情况选择“裁剪边缘”---确定。

八、注意事项

1、汞灯开启后必须至少使用0.5h才能关闭！汞灯关闭后若还需使用，必须等

0.5h后才能再次开启！

2、软件上如果没有显示“摄像控制”，通过以下方式调出：视图---工具窗口---

摄像控制。

3、在使用20X和40X物镜时，如不能清晰聚焦，先检查玻片是否清洁，放置是

否正确，再边转动物镜上的校正环，边聚焦，找到最佳校正位置。

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荧光,图像,选择,点击,物镜,观察,调节