激光共聚焦显微镜操作规程

2024年1月5日发(作者：汽车网上试驾)

激光共聚焦显微镜操作规程

一、准备工作

a) 打开计算机。依次打开激光器电源、钥匙开关。多线氩离子(458 nm, 488 nm, 514 nm) ON、氦氖绿(543 nm) ON、氦氖红(633 nm) ON。打开汞灯电源开关。

b) 登陆Windows XP系统。双击快捷方式：FV10-ASW 1.1。User ID: Administrator ; Passeword: Administrator。注意区分大小写。

二、显微镜镜下观察

１. 微分干涉差观察

a) 使用手控面板选择物镜。插入起偏镜。插入微分干涉滑块。

b) 点击FV10-ASW软件中的图标２.荧光观察：

c) 使用手控面板选择物镜。

d) 打开汞灯的机械快门，拉出DIC滑块，点击FV10-ASW软件中的图标

e) 使用手控面板选择荧光滤色片。标本聚焦。

３. 获取单张荧光图像

a) 点击FV10-ASW软件中的按钮b) 关闭汞灯快门，点击按钮c) 点击染料选择按钮d)

。

，关闭卤素灯快门。

。标本聚焦.

，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。点击Apply按钮。

点击XY Repeat按钮开始扫描。调节图像。点击Stop按钮停止扫描。

选择AutoHV,，并选择扫描速度。

点击XY按钮取得一幅图像。

点击SeriesDone按钮，“2D View-LiveImage(x)”2D界面就出现。

保存该幅图像:右图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像。(保存为“xml”类型是击FV10-ASW软件专用的图像格式。)

４. 获得单张（荧光+微分干涉）图像

a) 点击FV10-ASW软件中的按钮，关闭汞灯快门。点击按钮，关闭卤素灯快门。

b) 点击染料选择按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。点击Apply按钮。

c) 选择TD1。

d) 点击XY Repeat按钮开始扫描。调节绿色(FITC)图像和微分干涉差的图像。点击Stop按钮停止扫描。

e) 选择AutoHV, 并选择扫描速度。

f) 点击XY按钮取得一幅图像。

g) 点击SeriesDone按钮, “2D View-LiveImage(x)”2D界面就出现。

h) 保存该幅图像。

５.获取3D图像

例: 绿色荧光(FITC)和红色荧光(Rhodamine)双标（这里介绍线序列扫描取图的过程.）

a) 点击FV10-ASW软件中的按钮，关闭汞灯快门。同时，点击按钮，关闭卤素灯快门。

b) 点击染料选择按钮。在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。点击Apply按钮。

c) 点击序列扫描,并选择线序列方式。

d) 点击XY Repeat按钮开始扫描。调节绿色(AlexaFluor488)图像和红色(AlexaFluor546)图像。点击Stop按钮停止扫描。确定Z轴的上限和下限：从AcquisilionSelling对话框中，勾选StepSize，并输入StepSize大小(点击OP按钮可以使用推荐的值)。

e) 点击XY Repeat按钮开始扫描。点击f) 点击和按钮和按钮上移焦点位置。当图像显示到达上限时, 点击Set 按钮确定。

下移焦点位置。当图像显示到达下限时, 点击Set 按钮确定。点击Stop按钮停止扫描。

g) 选择AutoHV, 并选择扫描速度。选择Depth按钮。

h) 点击XYZ按钮取得图像。

i) 点击SeriesDone按钮, “2D View-LiveImage(x)”2D界面就出现。保存该幅图像

三、图像分析

１. 3D图像的叠加

a) 双击资源管理器中要选择打开的文件，出现2D界面。

b) 点击按钮并选择。

c) 要保存此图像, 右击此图像, 选择Save Display并命名。

２. 3D图像的重建

a) 以一定的角度观察3D图像，点击按钮b) 观察3D图像的某个横截面，点击按钮，创建3D图像。拖动鼠标以一定的角度观察图像。