口腔鳞癌化疗前后多药耐药基因表达变化的分析研究

2024年3月6日发(作者：中国一汽车型大全价格图片)

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丈片】【Ｉ腔Ｉ　：杂志（Ｊ　Ｐｒａｃｔ　Ｓｔｏｍａｔｏ１）２００２　Ｓｅｐ．１８（５）　口腔鳞癌化疗前后多药耐药基因表达变化的分析研究　张　杰　张建国　赵福运　［摘要］　目的：探讨化疗药物对ｕ腔癌多药耐药摹凶丧达的影响。方法：２１　『］腔癌患　．给　联合或　?的　药物进行化疗．用斑点杂交法检测其化疗前后ｒｏｄ，　１　ｍＲＮＡ的　达。结果：化疗后忠行的平均ｒｏｄ，　１　ｍＲＮ．＼拷　较化疗前明　增加（ｆＪ　０．０５）．联合化疗组增加明　（ｆ　（）．ｏ１）．　一化疗组九增　。结论：化疗约物【】ｒ诱导　【Ｊ腔墙细胞产乍多药耐药忡．表达ｉｌｌｄｌ　１增加。　关键词　鳞状细胞癌；多药耐药基因；药物治疗　Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｇｅｎｅ　ｍｄｒｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｏｒａｌ　ｓｑｕａｍｏｕｓ　ｃｅｌｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　ｃｈｅｍｏ—　ｔｈｅｒａｐｙ　Ｚｈａ　７　２　７ｉｅ．Ｚ　ｎｇ　Ｊｉａｌｌ￣ｚｔｏ。Ｚｈ［ｉ０　Ｆｕｙｕｎ．Ｓ（ｈ００［ｒＪ　，．Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇ　。Ｐｅｈｉｎｇ　Ｕ１ｚｉ　ｓｉｔｙ．ｔ３ｅｉ　，ｉｎｇ　１０００８１　Ａｂｓｔｒａｃｔ￣０　ｈｉｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｃｏｎｌｉ）ａ　ｒｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｈｉｄ　ｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｇｅｎｅ（＊ｍｈ‘１）ｉｎ　ｏ　ｒａｌ　Ｓ｛Ｉ　ＬＩＥＩＩ］］ＯＵＳ　ｃｅｌｌ　ｃａ　ｒ（’ｉ　Ｉ１０１１］ａ（Ｓ（、（、）ｂｏｆｏ　ｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　ｃｌｍｍｏｔｌｌｅｒａｐｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｍｄｔ　１　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　２　１　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｏｒａｌ　Ｓ（’（’ｗａｓ（１（、ｌｅ｛、　ｔｅｄ　ｈｃｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｈｙ　ｄｏｔ　ｂｌｏｔ　ｈｙｈｒｋｔｉｚａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　ｓｉｇｌｅ　ｄ　ｒｕｇ　ｃｈｅｒｏｏｔｈｅｒａｐ＇，　Ⅲ＜，　１　ｔｕＲＮ　、（、１０　ｃｏｐｉｅｓ　Ｐｇ）ｉｎ　Ｓ（’（、ｔｉｓｓｕｅ　ｗａｓ　１．９８±１．７２　ａｎ（１　３．７ｌ±３．２ｌ（Ｐ　＜０．０５）、ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　ｍｕｌｔｉ　ｄ　ｒｕｇ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｔｈａｔ　ｗａｓ　２．１　９±１．５８　ａｎｄ　１．８２二＝３．２５　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（ｆ　００．（］１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　（　ｘｐｏｓｅｄ　ｔ（）ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ａｇｅｎｔｓ　ｍａｙ　ｈｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｔＯ　ｅｘｐ　ｒｅｓｓ　ＩＩｌｄｌ　１．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｓｑｕａ　Ｉｉｌ０ｌｌＳ　ｃｅｌｌ（’“ｒ（　ｉｎｏｍａ；Ｍｕｌｔｉｄｌ　ｕｇ　７　ｅｓｉｓｔａ　ｎｔ　ｇｅｎｅ；Ｄ１　ｆ　ｆ／］Ｐ　７　“ｐＬ、’　中图分类号：Ｒ７３０．５３　文献标识码：Ａ　文章编号：１（）（］卜３７３３（２００２）一（）　一０　ｉ０５—０３　肿瘤细胞对化疗药物的耐受性是影响化疗结果的　最重要因素。肿瘤细胞接触一种化疗药物后．就可以　对其它结构与功能不同的数种药物产生抗药性．称为　获得性耐药　。其中多药耐药基因（ｍｕｈｉｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔ—　ａｎｌ　ｇｅｎｅ．Ｄｉｄ？　１）的表达与该现象有关。通过表达Ｐ糖　蛋白（Ｐ—ｇｌｕｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，Ｐ—ｇＰ）于细胞膜上。而使细胞内　７６岁．平均年龄为ｊ６岁．人院各项榆台止常后给　术　前化疗，其中１　１人行（）ＢＭ化疗。７人为平阳每袭单一　化疗。患者于化疗前及化疗结束后通过取活检行病理　确诊及行常规于术切除病变组织时．分别取约ｌ　ｇ癌　组织液氮冷冻后于一７０　Ｃ冰箱储仔。　１．１．２　化疗方案　（）ＢＭ：第１、２大长春新铖（Ｖ【、Ｒ）　１　ｒａｇ／（ｍ：×ｄ）静脉滴注．第３～７天平阳霉素８　ｍｇ　ｄ　静脉滴注，第８天氦甲喋呤３００　ｍｇ　ｄ静脉注射．第９、　ｌ０天甲酰四氧Ｉ１　酸钙ｌ５　ｍｇ肌肉注射Ｑ　６　ｈ；平阳霉　素：平阳霉素８　ｍｇ　ｄ×１２静脉滴注。　１．１．３　ＴＮＭ分类采用ＵＩＣＣ　１　９８７年公布的分级标　准。。。　药物泵出细胞外。降低细胞内的浓度。近期体外研究　证实．肿瘤细胞接触化疗药物后，耐药基因表达增　高！．但未有实体瘤细胞接触化疗药物的体内系统研　究：本研究的目的就是探讨人口腔癌接触化疗药物　．细胞耐药基因的表达变化。　ｌ材料和方法　１．１．４　病理分级采用ＷＨ（）１９８　１年公布的标准。。　１．１　研究对象及化疗方法　１．１．１　选自我院住院的经病理证实为口腔鳞癌的患　者２１人．其中男性为１１人，女性１０人，年龄由３２～　本研究为１日家自然科学基金资助项｝１编　３９２　７０　７２　ｌ　１．２　实验方法　１．２．１　总ＲＮＡ提取　将约１　ｇ的　７０　Ｃ储存的　口　癌组织标本置于匀浆器中。加入异硫氰酸胍变性　液（异硫氰酸胍　１　ｔｏｏｌ，／Ｉ　，柠檬酸钠２５　ｍｍｏｌ　Ｉ　。ＳＩ）Ｓ　５　ｇ／Ｉ　，Ｂ一巯基乙醇０．１　ｍｏｌ／Ｉ　）１．５　ｍｌ。匀浆，加入　作　：北京大学Ｌ　Ｊ腔医学院颌面外科　ｌ０００８ｌ　

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实片Ｊ口腔医学杂志（Ｊ　Ｐｒａｃｔ．Ｓｔｏｍａｔｏ１）２００２　ｅｐ，１　８（５）　ＮａＡｃ（２　ｍｏｌ　Ｉ　，ｐＨ４．０）溶液１　５Ｏ　ｌ，混匀，再加入饱　和酚氯仿异戊醇１．８　ｍｌ，用力振荡１０　ｓ后于冰上静　置１ｊ　ｍｉｎ后．１　Ｃ　ｌ０　０００　ｒ／／ｍｉｒｌ，离心２０　ｍｉｎ。取上　『』ｇ，二者之间无统计学差异。ＩＩ级共有１０人，化疗前　ｍｄｒｌ　ｍＲＮＡ拷贝数为１．２×１０　ｇ，化疗后为３．８６　×ｌ０　ｇ，后者较前者有统计意义的增加，Ｐ＜Ｏ．０５。　按Ｔ　Ｍ分级，Ｔ２共４人，Ｔ３　１０人，Ｔ４　７人，　层液体．加入等体积异丙醇溶液混匀，于一２ｏ　ｃ冰箱　静置１　ｈ后．于４　Ｃ　ｌ０　０００　ｒ／ｍｉｉ＂１离心２０　ｍｉｉ＂１。将上　清液倒掉．可见少许白色沉淀，将沉淀再次溶于ｌｊＯ“ｌ　ｍｄｒｌ　ｍＲＸＡ拷贝数化疗前后无显著意义的差异。　２１人中有１０人化疗后ｍｄｒｌ　ｍＲＮＡ拷贝数增　加．１０人无变化，只有１人化疗后降低。化疗后患者　的表达拷贝数范围为０．６×１０　～ｌ０×１０　，／ｔ￣ｇ，平均为　异硫氰酸胍变性液中，摇动使其完全溶解，加入等体积　异丙醇溶液于一２Ｏ　Ｃ冰箱１　ｈ，４　Ｃ　１０　０００　ｒ／ｍｉｎ离　心２０　ｍｉｎ。将ＲＮＡ沉淀用（ｐ一７５　冷乙醇洗涤２次　．３．７４×１０。／＇／￣ｇ，与化疗前相比显著增加，Ｐ＜０．０５，见　表ｌ。　表１　【ｊ腔犏化疗前后平均ｍｄｒｌ　ｍＲＮＡ含节（×１０　／ｔ￣ｇ）　真空抽干。　１．２．２斑点杂交　①标准条制备：将ｍｄｒｌ　ｃＤＮＡ质　粒ｐｃｈｐ一１（由北京大学人民医院中心实验室惠赠）．稀　释为１Ｏ０、５Ｏ、２０、１０、　、２、ｌ　ｐｇ／１Ｏ０　ｆ』ｌ，第８管为阴性　对照．将其用点膜器点于硝酸纤维素膜上，负压抽干，　８（）（烤箱放置２　ｈ。②ＲＮＡ斑点杂交：将标本ＲＮＡ　用午一３７　甲醛２（　ｆ』１．２０×ＳＳＣ　３０『』ｌ稀释，使得ＲＮＡ　含量分别为１　０、３、ｌ、０．３　ｇ．混匀。５８　Ｃ水浴１　ｒａｉｎ　本组实验根据化疗方案，可分为两组，一组应用　平阳霉素单一药疗，而另一组为应用长春新碱、平阳霉　素及氨甲喋呤的联合化疗。经过比较，二组化疗前后　ｍｄｒｌ　ｍＲＮＡ拷贝数增加的量有显著性差异（Ｐ＜　０．０１），联合化疗组化疗后ｍｄｒｌ　ｍＲＮＡ增加明显。　表２化疗药物Ｌｊ　ｕ腔癌平均　ｌ　ｒｌ　ｍＲＮＡ含量关系（×１０　ｇ）　岳．迅速置于冰浴中冷却５　ｒａｉｎ。安置点膜器，依次加　入稀释后的ＲＮＡ样品，负压抽干。将膜放人６×ＳＳＣ　溶液中漂洗２　ｒａｉｎ，室温晾干，８Ｏ　Ｃ　２　ｈ。③探针预　备：取质粒ｐｃｈｐ—ｌ　ｌ　ｆ』ｌ（含１Ｏ０　ｎｇ）稀释成ｌＯ　ｌ，１００　（水浴５　ｒａｉｎ．立即置于０（　ｒａｉｎ。加入与探针等体　积的酶标复合物．混匀，再加入同样体积的戊二醛。３７　水浴ｌ　～３０　ｒａｉｎ．立即使用。①杂交：将标准条与　样品ＲＮＡ制备的硝酸纤维素膜分别封入塑料袋中，　加入杂交液约３　ｍｌ（内含３％阻断剂），４２　Ｃ　２　ｈ进行　预杂交。然后加入制备好的探针，４２　Ｃ摇动过夜。⑤　３　讨　论　洗膜：从袋中取出膜．放人预热的第一洗膜液中．于４２　（　摇动漂洗２Ｏ　ｍｉｎ，共２次。将膜再放入２×ＳＳＣ中．　室温下漂洗１０　ｒａｉｎ。共２次。⑥发光及显影：将发光　试剂盒中的Ａ液与Ｂ液等体积混匀后，把膜放人其中　１　ｒａｉｎ．取出膜．用保鲜膜包裹放人暗盒，将Ｘ线胶片　细胞的耐药可以先天性内源性表达，如肾上腺等　组织来源的肿瘤，也可以经过不断地接触某些化疗药　物而诱导产生，后者称为获得性耐药　。我们通过实　验发现，２１例肿瘤标本通过斑点杂交检测ｍｄｒｌ　ｍＲ—　ＮＡ由化疗前平均１．９８×１０　ｇ增加到３．７４×１０　置于其Ｉ：。压片１　ｒａｉｎ，洗片。根据显影强弱再压片ｊ　～ｇ，二者之间存在显著性差异。说明化疗药物可诱使　上皮细胞耐药基因表达增加。关于获得性耐药的研　究，大多停留在细胞水平。许多研究证实敏感的原代　细胞培养液中逐步加入化疗药物，最终细胞表达ｍｄｒｌ　１０　ｒａｉｎ。然后取出显影，定影。⑦测吸光度：用灰度　扫描仪扫描各点的吸光度值（Ａ）。　结　果　或随着药物浓度增高ｍｄｒｌ表达也逐渐增大　。许多　作者发现接触过化疗药物的癌瘤如乳腺癌，较未接触　过化疗药物患者的Ｐ—ｇＰ表达明显增加　。这种研究　根据标准条的量计算出每个样本的拷贝数，本实　验通过斑点杂交共检测了２１例未接受过治疗的口腔　鳞癌Ⅲｃ，，　１　ｍＲＮＡ表达，通过与质粒标准条计算．其　表达范围为０．３×ｌ０。～ｊ×１０　为１．９８×１　０　ｇ总ｍＲＮＡ。　ｇ，化疗后为３．６３×１０　ｇ总ｍＲＮＡ。平均　没有体现出癌瘤本身化疗前后基因表达的关系。Ｆｏ—　ｊ０　“曾报道ｌ例嗜铬细胞瘤化疗后较化疗前表达增加　ｌ６倍。有ｌ例　ＨＩ　化疗后ｍｄｒｌ　ｍＲＮＡ较化疗前高　８倍，再次复发时增加到２４倍　。实体瘤由于取样　困难，因而对研究化疗前后ｍｄｒｌ　ｍＲＮＡ表达存在一　按病理分级，Ｉ级共有１１人，化疗前ｍｄｒｌ　ｍＲ—　Ａ拷贝数为２．６８×１０　

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实用Ｌ】腔医学杂志（Ｊ　Ｐｒａｃｔ　Ｓｔｏｍａｔｏ１）２００２　Ｓｅｐ，１８（５）　?４０７?　定困难。本实验结果在研究实体瘤获得性耐药方面首　次肯定了临床实体瘤患者在化疗后ｍｄｒｌ表达增加，　即产生获得性耐药。从病理分级来看，Ｉ、ＩＩ级口腔癌　化疗后较化疗前ｍｄｒｌ表达均增加，ＩＩ级有统计意义，　可能是由于分化差的细胞在接触药物刺激后，能更快　地产生基因变异，保护自己。但ｍｄｒｌ表达似乎与肿　瘤的体积并无关联。　目前发现，可以诱导肿瘤细胞产生耐药基因表达的　药物有多种，如长春碱属、蒽醌类等。文献中未发现有　关于平阳霉素耐药的报道。本实验发现单一药物化疗　组中化疗后较化疗前ｍｄｒｌ表达略有升高，亦有下降，而　联合药物化疗组中化疗后耐药基因拷贝由２．１９×１０　／　ｇ升到４．８２×１０　／ｘｇ，二者有显著性统计意义。尽管　以前研究认为接触一种化疗药物即可使患者的耐药性　增加．耐药基因表达增加，本文研究认为平阳霉素诱导　９　３　４　Ｉ＾　６　７　８　９　１　耐药基因表达的作用可能不如长春新碱及氨甲喋呤。　由于本研究中使用单一平阳霉素化疗的病例数较少，尚　需深入研究方能证实。然而临床化疗时，应考虑选择敏　感的低耐药的药物以及低诱导耐药的药物。　参考文献　Ｉ　Ｂｉｅｄｌｅｒ　Ｊ　Ｉ　．Ｒｉｅｈｍ　Ｈ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　ａｃｔｆｉｎｏｍｙｃｉｎ　ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈａｍｓｔｅｒ　ｃｅｌｌｓ打７　Ｖｉｌｒｏ：Ｃ　ｒｏｓｓ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｒａｄｉｏａｕｔｏ　ｇｒａｐｈｉｃ．ａｎｄ　ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．１９７（），３Ｏ：　碧兰麻用于心电监护拔牙的疗效观察　郑建娟　薛振恂　吴继聪　居云　３讨论　需心电监护拔牙的患者通常年龄大，患有心脏病、高血压　等症，拔牙疼痛刺激会诱发心电、血压的变化。冈此，无痛拔牙　是心电监护牙首先要解决的问题。　首次麻醉效果不理想者，常见原因是麻醉位置偏蔑或局部　（西安第四军医大学口腔医学院颌面外科　７１００３２）　碧兰麻属于酰胺类麻醉药，由于其麻醉起效时间怏，组织　渗透性强．毒副作用小，麻醉效能高，正逐渐在临床推广使用，　我院于２（／００年８月起，将碧兰麻用于心电监护拔牙，取得了满　意的效果。　１　临床资料　一一一　一　一一一一　一　一　一一一一　一一　一～　一　者使用后，均无不适。　有炎症。对于第一种情况，追加一次麻醉就能取得满意的效果：　但是第二种，追加一次麻醉后，部分患者的麻醉效果仍　满意。　使用碧兰麻局部追加浸润麻醉，无论第一种还是第二种情况，患　者在拔牙过程中和拔牙后均不再疼痛。碧兰麻麻醉使用的注射　器与普通注射器不同，是金属针管，其内径小，针头细．所以麻莼　本组资料２４例。高血压患者６例，其中男１例，女５例；　年龄最大８ｊ岁，最小６８岁，平均７０岁。心脏病患者１８例，其　中男５例，女１　３例，年龄最大７８岁，最小５０岁，平均６７岁。　应用碧兰麻的时机与疗效　注人组织时产生的压强大，对组织的渗透性强，麻醉起效快。　『临床上，对高血压、心脏病患者应慎用肾上腺素。普通拔　牙患者使用的麻醉药，肾上腺素含量为１／１０万～１／２０万，以每　位患者注射５　ｍｌ计算，注人的肾上腺素含量为０．０２５～０．０５　ｍｇ。碧兰麻的主要成分是４Ｏ　ｇ／Ｌ的盐酸阿替卡因含１／１０万　肾上腺素。按照使用说明，碧兰麻含肾Ｅ腺素１／１０万．对高血　压患者和老年人应慎用，但是，碧兰麻每支１．７　ｍＩ，内禽肾ｊ　腺　素量为０．０１　７　ｍｇ，心电监护拔牙患者追加的碧兰麻只用０．５　ｍＩ即可，肾上腺素含量为０．００５　ｍｇ，是普通拔牙患者的１　１Ｏ，　使用剂量极小，术中监护患者血压、心率无明显变化．２４例患　（收稿：２００１　Ｏ７一ｏ９修回：２００ｌ一１　２　１　７）　碧兰麻主要用于心电监护拔牙麻醉效果不佳时的追加麻　醉，拔牙麻醉常用２Ｏ　ｇ／ｌ　利多卡因＋５　ｇ／ｌ　布比卡因以１：１的　利量混合液（简称“利和布”），使用量为５　ｍｌ。统计我院１　２ｌ８例　心电监护拔牙患者，初次麻醉疗效不满意者为２４２例经追加１～　２次“利一布”麻醉后，仍有８ｏ例患者麻醉效果不佳。本组２４例　患耆仅用小刹量（Ｏ．５　ｍ１）碧兰麻追加麻醉，效果全部满意。