2023年12月15日发(作者：红旗h9多少钱一辆)

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课时跟踪检测（三） 微生物的选择培养和计数

一、选择题：每小题给出的四个选项中，只有一个选项是最符合题目要求的。

1．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为( )

A．鉴别培养基

C．选择培养基

B．加富培养基

D．基础培养基

解析：选C 选择培养基是在培养基中加入特殊营养物质或化学物质，抑制不需要微生物的生长，有利于所需微生物生长的培养基。

2．测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是( )

A．细菌个体小，真菌个体大

B．细菌易稀释，真菌不易稀释

C．细菌在土壤中数量比真菌多

D．随机的，没有原因

解析：选C 土壤中的微生物大约70%～90%是细菌，真菌的数量要比细菌少。样品的稀释度越高，在平板上生成的菌落数目就越少。在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300之间，适于平板计数，因此细菌的稀释倍数要高于真菌的稀释倍数。综上分析，C项正确，A、B、D三项均错误。

3．分离土壤中分解尿素的细菌时，对培养基的要求是( )

①加尿素 ②不加尿素 ③加琼脂 ④不加琼脂 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦加硝酸盐 ⑧不加硝酸盐

A．①③⑤⑦

C．①③⑤⑧

B．②④⑥⑧

D．①④⑥⑦

解析：选C 土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶，将尿素分解生成氨，利用尿素中的氮合成自身有机物。培养基中尿素作为唯一氮源，分解尿素的细菌能生长，其他微生物不能生长；分离微生物要用固体培养基，需要加琼脂；土壤中分解尿素的细菌属于异养微生物，需要加葡萄糖作为碳源。

4．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，原理是( )

A．菌落中的细菌数目是固定的 第 2 页 共 7 页

B．平板上的一个菌落就是一个细菌

C．通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同

D．平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌

答案：D

5．下列操作需要在火焰旁进行的是( )

①土壤取样 ②称取土壤 ③稀释土壤溶液

④涂布平板 ⑤微生物的培养

A．①②③④⑤

C．③④⑤

B．②③④⑤

D．②③④

解析：选D 实验操作过程要进行严格的无菌操作，除实验空间必须消毒外，每个操作步骤都必须在无菌区进行。土壤的称取、溶液的稀释、涂布平板都需要在酒精灯火焰旁的无菌区(或接种箱内的酒精灯火焰旁)完成，以防止杂菌污染。

6．用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是( )

A．未接种的选择培养基

B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基

C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基

D．接种了的选择培养基

解析：选C 将菌液稀释相同的倍数并接种，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目应明显多于选择培养基上的菌落数目，因此，应选择接种的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照实验遵循的原则是单一变量原则。

7．下列关于从土壤中筛选纤维素分解菌的实验步骤的排列顺序，正确的是( )

A．土壤取样→梯度稀释→稀释涂布平板→挑选菌落

B．土壤取样→选择培养→稀释涂布平板→挑选菌落

C．土壤取样→梯度稀释→选择培养→挑选菌落

D．土壤取样→梯度稀释→稀释涂布平板→选择培养

解析：选B 从土壤中筛选纤维素分解菌的实验流程是“土壤取样→选择培养→稀释涂布平板→挑选菌落”，其中选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度，因此需要在稀释涂布平板之前进行，最后根据菌落的特征挑选纤维素分解菌的菌落。

8．农田土壤的表层中自生固氮菌的含量比较高，将用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开。对培养基的要求是( )

①加抗生素 ②不加抗生素 ③加氮源 ④不加氮源 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 第 3 页 共 7 页

A．①③⑤

C．②④⑤

B．②④⑥

D．①④⑥

解析：选C 一般加入抗生素的培养基可以培养有相应抗性基因的工程菌，而正常情况下细菌对抗生素敏感，抗生素能抑制细菌的生长，因此培养基中应不加抗生素，故①错误，②正确。分离筛选固氮菌关键在于培养基是否加入氮源，自生固氮菌有固氮功能，因此培养基中不需要加氮源，故③错误，④正确。自生固氮菌是异养菌，需要加入葡萄糖，故⑤正确，⑥错误。综上所述，②④⑤正确，①③⑥错误，故选C项。

二、选择题：每小题给出的四个选项中，有的只有一个选项正确，有的有多个选项正确。

9．下列有关稀释涂布平板法的叙述，错误的是( )

A．首先将菌悬液进行一系列的梯度稀释

B．然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面

C．涂布器灼烧灭菌后，立即进行平板上涂布

D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落

解析：选CD 稀释涂布平板法是将菌悬液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。只有在稀释度足够高的菌悬液里，聚集在一起的微生物才能被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个的菌落。

10．下列关于微生物分离和培养的叙述，正确的是( )

A．可采用干热灭菌法对微生物培养基进行灭菌

B．测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法

C．分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度

D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源

解析：选BCD 培养基灭菌通常用的是高压蒸汽灭菌法，而干热灭菌法通常适用于玻璃器皿、金属用具等耐高温且不适合其他方法的物品；分离能分解尿素的细菌，用的选择培养基中尿素是唯一的氮源，这样才能分离出分解尿素的细菌。

11．使用液体选择培养基培养纤维素分解菌的目的是( )

A．用液体选择培养基可获得大量纤维素分解菌

B．用液体培养基便于稀释涂布平板

C．纤维素分解菌只能在液体培养基中生长

D．用液体培养基可鉴别纤维素分解菌 第 4 页 共 7 页

解析：选AB 使用液体选择培养基培养纤维素分解菌，一方面可以获得大量纤维素分解菌，另一方面便于稀释涂布平板。纤维素分解菌也可以在固体培养基上生长；鉴别纤维素分解菌使用的是固体培养基。

12．下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法，正确的是( )

A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离

B．测定土壤中不同微生物的数量，选用的稀释范围不同

C．如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数

D．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显小于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落

解析：选ABC 样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目。实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。土壤中不同类型的微生物的数量不同，因此在测定其数量时，选用的稀释范围也不同。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基的筛选作用。

三、非选择题

13．某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：

(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生__________。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是__________________________________________。但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是______________________________________________(答出两点即可)。

(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有________________________________________________________________________

________________________________________________________________________

(答出两点即可)。 第 5 页 共 7 页

解析：(1)土壤中的某些细菌之所以能够分解尿素，是因为它们能产生脲酶。尿素分解菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物，必须利用现成的有机物(如葡萄糖)作为碳源；葡萄糖通过呼吸作用被分解时，能为细胞生命活动提供能量，同时，葡萄糖还可以转化成脂肪、某些氨基酸等物质，所以进入细菌体内的葡萄糖能为其他有机物的合成提供原料。(2)选择培养基是只允许特定种类的微生物(目的微生物)生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。本实验的目的菌是可分解尿素的细菌，因此配制的培养基应只允许尿素分解菌生长，NH4NO3可以作为所有细菌的氮源，培养基中如含有NH4NO3，将不能起到筛选作－/HPO2－可用。(3)KH2PO4和Na2HPO4能为细菌生长提供钾盐、钠盐和磷酸盐，而H2PO44作为缓冲剂，使培养基中pH保持相对稳定。

答案：(1)脲酶 分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物 为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料 (2)尿素 其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用 (3)为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定

14．图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，回答相关问题：

(1)图甲是利用____________法进行微生物接种，图乙是利用____________法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是________和________；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是____________和酒精消毒。

(2)平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少，每次划线都要从____________________开始，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线________。

(3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(4)下图是接种后培养的效果图，其接种方法是______(填“图甲”或“图乙”)。

(5)假设用图乙所示方法接种培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？________________________________________________________________________ 第 6 页 共 7 页

________________________________________________________________________。

解析：(1)图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物接种，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。(2)平板划线时，每次划线前都要从上一次划线的末端开始，最后一次划线不能与第一次划线相连。(3)由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。(4)培养基上的菌落分布均匀，接种方法为稀释涂布平板法。(5)采用稀释涂布平板法进行菌种分离时，稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。

答案：(1)平板划线 稀释涂布平板 接种环 涂布器 灼烧灭菌 (2)上一次划线的末端 相连(或相接、相交、交叉等) (3)火焰附近存在着无菌区域 (4)图乙

(5)稀释倍数不够，菌液的浓度太高

15．尿素是一种重要的农业氮肥，不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的微生物将尿素分解后才能被植物吸收利用。因此，对土壤中分解尿素的微生物进行分离和鉴定具有重要意义。回答下列问题：

(1)对土壤中分解尿素的微生物的分离过程如下：

第一步：土壤取样。取土样用的工具和盛土样的信封等在使用前都需要________(填“消毒”或“灭菌”)。

第二步：样品稀释。通常分离不同种类的微生物要采用不同的稀释度，原因是________________________________________________________________________。

第三步：微生物的培养与观察。将一定稀释度的样品接种在以尿素为唯一氮源的培养基上，并在适宜的条件下培养。分解尿素的微生物能在该培养基上生长繁殖，而________________________________则不能生长繁殖。

(2)若对土壤悬液进行梯度稀释时，未经振荡而直接取上层悬液进行梯度稀释，用稀释倍数为104的样液涂布到平板上进行培养和计数，统计出的菌落数往往比正确操作统计出的菌落数____________。

(3)若要对上述初步筛选出的分解尿素的微生物作进一步的鉴定，需在如表所示培养基配方中添加的物质是________、________。若分离得到的是尿素分解菌，则培养基中pH升高使酚红指示剂变为红色，pH升高的原因是____________________________________。

成分

培养基

(含量)

1.4 g 2.1 g 0.2 g 0.01 g 1.0 g

KH2PO4 Na2HPO4

MgSO4·

7H2O

酚红

指示剂

尿素 蒸馏水

定容至

1 000 mL

解析：(1)取土样用的工具和盛土样的信封等在使用前都需要灭菌。由于土壤中不同微第 7 页 共 7 页

生物的数量不同，因此分离不同种类的微生物要采用不同的稀释度。将一定稀释度的样品接种在以尿素为唯一氮源的培养基上，并在适宜的条件下培养，分解尿素的微生物能在该培养基上生长繁殖，不能利用尿素的微生物则不能生长繁殖。(2)若对土壤悬液进行梯度稀释时，未经振荡而直接取上层悬液进行梯度稀释。由于此种细菌属于需氧型细菌，主要分布在上层培养液，因此用稀释倍数为104的样液涂布到平板上进行培养和计数，统计出的菌落数往往比正确操作统计出的菌落数偏高。(3)培养基的成分应包括碳源、氮源、水和无机盐等。若要对上述初步筛选出的分解尿素的微生物作进一步的鉴定，需在表中培养基配方中添加的物质是葡萄糖(作为碳源)、琼脂(固体培养基中的凝固剂)。若分离得到的是尿素分解菌，则尿素分解菌合成的脲酶将尿素分解成氨，使培养基中的pH升高，酚红指示剂变为红色。

答案：(1)灭菌 土壤中各类微生物的数量不同 不能利用尿素的微生物 (2)偏高

(3)葡萄糖 琼脂 尿素分解菌合成的脲酶将尿素分解成氨

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